正交实验法优选调肝化瘀颗粒提取工艺探究.docVIP

正交实验法优选调肝化瘀颗粒提取工艺探究? 基金项目：浙江省科技厅科研院所开发专项资助项目中药新药调肝化瘀颗粒治疗血管性痴呆症临床前研究，编号：2004F12025 摘要 目的:正交实验法优选调肝化瘀颗粒的提取精制工艺。方法:分别以芍药苷和丹酚酸B的含量作为考察指标,分别采用L?9(3?4)正交表进行试验,优化了柴胡、芍药、丹参、栀子等中药的水提取醇沉工艺。结果：加水总量20倍，提取3次，总提取时间4小时为最佳提取工艺，浓缩至相对密度约1．05，加乙醇至含醇量70%为最佳醇沉工艺。结论：正交实验法可优选调肝化瘀颗粒的药物。? 关键词 提取精制工艺 正交实验法 调肝化瘀颗粒?? 调肝化瘀颗粒由柴胡、芍药、丹参、栀子、黄芪、三七等组成，具有调肝解郁、化瘀通络的功效，对治疗老年血管性痴呆症有确切的疗效。为了将传统的煎剂改为颗粒剂，对其提取工艺进行优选。根据中药材的理化性质，初步确定了由柴胡、芍药、丹参、栀子等中药的水煎醇沉工艺，黄芪的水煎提取工艺，三七的醇回流提取工艺组成的药材提取工艺。并分别采用正交设计试验优化了提取工艺。现小结如下。? 1 材料? 1．1 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇为药用乙醇，其余试剂均为分析纯，重蒸水。芍药苷（批号0736-9811）、丹酚酸B(批号111562．200302）等，购自中国药品生物制品检定所。? 1．2 药材：柴胡、芍药、丹参、栀子、黄芪、三七等均购自浙江省临安医药药材有限公司，经鉴定符合《中国药典》2000年版一部规定。? 1．3 仪器：Micro-tech Ultra-Plus Ⅱ高效液相色谱仪（美国微科）；LC-10A高效液相色谱系统(日本岛津)；METELLER电子分析天平(瑞士)；KQ-400型数控超声波清洗器（昆山）。? 2 方法与结果? 2．1 芍药苷的含量测定：①色谱条件：伊利特ODS-2分析柱（4．6mm×150mm），流动相为乙腈-水（17∶83），流速0．9ml/min，检测波长230nm，柱温25℃。②对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品3．5mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，制成每1ml含芍药苷0．14mg的对照品溶液。③标准曲线的绘制：在上述色谱条件下，分别精密吸取芍药苷对照品1、2、5、5、7、5、10μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，芍药苷浓度（C）为横坐标，得回归方程：A=10796．9+437920．1C，r=0．9996，线性范围为0．28～2．80μg。表明：芍药苷在0．28～2．80μg范围内呈良好的线性关系。④供试品溶液的制备：取供试品，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇匀，静置半小时，上清液经0．45μ微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。⑤样品测定：分别精密吸取对照品、供试品各2μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，按外标法，以峰面积计算芍药苷含量，即得。? 2．2 丹酚酸B的含量测定：①色谱条件：伊利特DOS-2分析柱（4．6mm×150mm），甲醇-乙腈-水-甲酸（30∶10∶59∶1），流速0．9ml/min，检测波长286nm，柱温25℃。②对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的丹酚酸B对照品2．lmg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每lml含丹酚酸B 0．21mg的对照品溶液。③标准曲线的绘制：在上述色谱条件下，分别精密吸取丹酚酸B对照品1、2、5、5、7、5、10μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，丹酚酸B浓度（C）为横坐标，得回归方程：A=6791．5+268238．9C,r=0．9999，线性范围为0．21～2．10μg。④供试品溶液的制备：取供试品，精密吸取0．3ml，置10ml容量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇匀，静置半小时，上清液经0．45μ微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。⑤样品测定：分别精密吸取对照品、供试品各2μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，按外标法，以峰面积计算丹酚酸B含量，即得。? 2．3 提取工艺的选择：①药材含量测定：芍药中芍药苷含量为16．4650mg/g；丹参中丹酚酸B含量为0．2115mg/g。②正交试验设计：以提取次数、提取时间、加水量为因素，各设3个水平，采用L?9（3?4）的正交表进行试验。以芍药苷、丹酚酸B提得含量为指标，采用综合评分法，对提取工艺进行考察，选择最佳提取工艺。 实验结果 详见表1。结果显示三因素均无显著影响，但以第3水平为优。综合考虑，水提工艺选择A?3B?3C?3，即提取3次，总提取时间4小时（2、1、1小时），总加水量20倍（9、6、5倍