CCNL1和TIMP1基因对人乳腺癌细胞增殖及相关基因表达之影响.docVIP

　　CCNL1和TIMP1基因对人乳腺癌细胞增殖及相关基因表达之影响 第一篇 文献综述 第一章基质金属蛋白酶抑制因子-1 研究进展 基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）广泛分布于动物和人类基因组中，主要作用就是对金属蛋白酶细胞外基质和细胞表面分子的降解。此外对于对于细胞生长和分化，细胞迁移，血管的生成以及细胞凋亡等均具有作用。有些作用机制已经确定，随着 TIMP 基因缺失小鼠建立，将有助于进一步了解 TIMP 的生物学作用机制[1]。 1.1TIMP1 基因概况 TIMPs是基质金属蛋白酶(MMPs)的天然抑制物，是一组能抑制基质金属蛋白酶(MMPs)活性的多功能因子家族，在肿瘤细胞与间质细胞中均可表达。编码TIMP1的基因定位于Xp11. 1-p11. 4，基因全长4500bp。转录子大小为900bp。TIMP基因家族中，各成员的编码序列均位于synapsin基因内含子中。如，果蝇的一个TIMP基因在其synaPsin基因的内含子中，序列分析发现该TIMP基因有35%的序列与人TIMPS的一致；而在结构上，也具有保守的内含子、外含子结构[2]。而人的TIMP1基因则位于Synapsin-I基因的内含子6中。人体中的TIMP共有4种：TIMP1， TIMP2，TIMP3和TIMP14。搜索基因数据库发现在很多物种体内，如鸡、两栖类、鱼类、昆虫、软体动物以及线虫(Colegans)等体内都能找到与哺乳类的TIMP同源的蛋白和cDNA。 1.2 TIMP1 蛋白结构 TIMP1蛋白分子大小为28.5KD，很多的实验结果证明：(1)TIMP中二硫键的排列方式[3]为：N端和C端均各有3个稳定的二硫键，N端和C端相对独立，(2)TIMP与底物的结构图谱也提示其有2个结构域，(3)仅单独的N末端120个基团就可折叠和形成有活性的MMP抑制剂[4]。TIMP的全长是连续的，这是由于TIMP的C-末端区域能够紧密结合在其N-末端OB-折叠结构上，很多的具有2个结构域结构蛋白中均存在相似的情况，如免疫球蛋白Fab区域等。而在模式生物C.elegans中，TIMP蛋白仅有N-末端结构域，这提示目前的TIMP的祖先很可能是单结构域的。 TIMP1的蛋白结构包括C末端和N末端两个功能域。高度保守的二级结构功能域能与MMPs结合，特异性抑制MMPs的蛋白水解活性，在组织中参与MMPs活性的调控。C末端结构域能与MMPs(尤其pro-MMP-9)以1: 1的非共价键结合形成复合物而抑制其活性，从而抑制细胞外基质的降解，终止癌细胞浸润，从而抑制癌细胞的扩散。N末端位于二硫键附近的Cys-1-Cys-70残基，可通过螯合锌原子来抑制MMPs的水解作用，这个功能域如果被烷基化或者发生突变，则会失去抑制MMPs的作用。N -端区域的结构具有高度保守的蛋白酶抑制剂序列，能够抑制金属蛋白酶。在 Cys1-X-Cys3 序列中的半胱氨酸能够与Cys70 和 Cys100 以二硫键连接。这些结构特点表明TIMP -金属配合物所具有的抑制作用是与蛋白质相互作用的核心密切相关。大多数（60％-75％）的 TIMP 和基质金属蛋白酶之间的相互作用是由MMPs的N-末端形成的连续五残基即Cys1-Thr-Cys-Val- Pro5及连接sC和sD环结构（CDloop）与TIMP1中的Met66-Glu-Ser-Val-Cys70残基作用，通过Cys70和Cys1之间的共价二硫键连接来发挥作用。在金属蛋白酶活性中心插入的连接结构，都具有TIMP保守的N-末端的Cys1结构，能够催化锌离子发挥抑制作用。所以抑制机制的关键是金属离子配位的N-端alpha;-氨基和羰基的Cys1，主要作用是取代肽键水解需要的酶分子。在所有脊椎动物中，苏氨酸或丝氨酸的蛋白酶抑制剂与MMP特异性的相互作用，丝氨酸或苏氨酸作为一个作用位点，它具有决定酶的专一性作用。蛋白酶活性位点的第3-5残基间相互作用主要通过断裂的C末端残基的肽发挥作用，而Ser68和Val69之间的相互作用主要是通过MMP的S2和S3结构（即位于肽链N端的残基结构）发挥功能。TIMP1具有AB、CD、EF等多个环状结构，并作为其作用于MMPs的活性中心，AB的环状结构位于CD环状结构和EF环状结构的左侧。在不同的蛋白酶抑制剂之间的AB环状结构不同，这种结构变化影响它们与MMPs之间的相互作用。在N-TIMP3与ADAM17的复杂催化结构域当中，还涉及了sD的C-末端的相互作用。[5]但是到目前为止这些发生在TIMP3蛋白酶与ADAM17或独有的ADAMs是否有其他的相互作用还尚不清楚。 第二章细胞周期调节蛋白-1 研究进展 细胞周期蛋白 L1（CL1）是细胞周期蛋白家族的成员之一，其中包含C-末端富含精氨酸和丝氨酸（RS）的结构域和集群染