柴胡皂甙d对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响.docVIP

　　柴胡皂甙d对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响 ：张国平，祝葆华，王兰天，童传明，敬敏 【摘要】 目的 探讨柴胡皂甙d（SSd）对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法 (1)常规培养人肝癌HepG2细胞；(2)噻唑蓝（MTT）实验观察不同质量浓度SSd处理HepG2细胞72 h后以及10mg/L的SSd作用HepG2细胞不同时间对HepG2细胞生长指数的影响；(3)流式细胞术（FCM）检测SSd处理HepG2细胞48h后细胞周期的分布。结果 SSd能明显抑制HepG2细胞的增殖，以10mg/L的SSd作用48h的抑制作用最明显。FCM检测显示SSd作用48h后实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少（Plt;0.01）。结论 SSd对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,并能使细胞周期中处于S期的细胞数减少。 【关键词】 柴胡皂甙d; HepG2; 增殖； 细胞周期 Abstract: Objective To study the effects of saikosaponinsd (SSd) on proliferation and cell cycle in the human hepatocellular carcinoma cell line, HepG2 cell line. Methods HepG2 cells easured by monotetrazdium（MTT） assay and the cell cycle ined by the floetry (FCM) analysis. Results The SSd obviously inhibited the proliferation of HepG2 cell line in a concentration and time dependent manner, the maximum response of the cells to SSd g/L and the treatment timepoint of 48h. pared g/L SSd for 48h significantly reduce cell numbers in S phase (Plt;0.01). Conclusion The SSd could inhibit the proliferation of HepG2 cell line and arrest its cell cycle in S phase. Key 1640,GIBICO,USA)；新生牛血清（杭州四季青生物材料工程公司）；胰蛋白酶(美国Gibco公司)；96孔细胞培养板(Corning公司)；四甲基偶氮唑蓝（MTT）（北京华美生物工程公司）；碘化丙啶（PI）染色液（南京凯基生物公司）；HepG2细胞由广东医学院天然药物研究与开发重点实验室长期冻存；超净工作台；CO2孵箱；倒置相差显微镜；酶标仪(ELX800,USA)；流式细胞仪（EPICS XL Coulter, USA）。 1.2 方法 　　1.2.1 HepG2细胞的培养 　　HepG2细胞于含体积分数10%小牛血清,100U/mL青链霉素的RPMI1640中,放置于37℃、体积分数为5%、饱和湿度的CO2孵箱中培养,每两天传代一次。取对数生长期的细胞用于实验。 　　1.2.2 SSd溶液的配制 　　 电子 天平称取SSd粉末10mg加入200 μL DMSO溶解,用无血清RPMI1640培养液定容为25mL得SSd溶液质量浓度为400mg/L。0.22μm过滤除菌,用无血清RPMI1640培养液分别稀释为200、100、50、25mg/L4种质量浓度,4℃保存备用。 　　1.2.3 四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测SSd对细胞增殖的影响 　　制备细胞悬液并调整细胞浓度为4×104/mL,接种于96孔板,每孔100μL（4000个细胞）。培养箱内培养过夜后随机分为4组。分别加入含SSd终质量浓度为20、10、5、2.5的培养液200μL，并设加等体积RPMI1640培养液的阴性对照组,每组5个复孔。分别作用24、48、72h后每孔加入新鲜配制的0.5%MTT储存液20μL/孔,继续培养4h,弃上清后每孔加入DMSO 150μL,低速震荡10min以溶解细胞内结晶。酶标仪检测各孔570nm处吸光值,按如下公式 计算 抑制率。抑制率=(对照组A值实验组A值)/对照组A值×100%。 　　1.2.4 FCM检测SSd对细胞周期的影响 　　取对数生长期的HepG2细胞传代,培养箱内培养过夜,将HepG2细胞的培养液换为含10mg/L的SSd溶液,继续培养48h。0.25%胰蛋白酶溶液消化细