重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移侵袭并抑制其凋亡.PDF

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(7): 746–751 http ://www.cj 重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和 迁移侵袭并抑制其凋亡 游 莉 徐兰兰 郭元元 孙双双 邹正渝 黎玉叶 罗进勇 何通川 周 兰* (重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆400016) 摘要 该研究旨在探讨重组人S100A6蛋白对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖、凋亡、迁移及 侵袭能力的影响。利用原核表达制备重组人S100A6蛋白(GST-hS100A6), SDS显示其大小 为36 kDa, Western blot显示其可以被S100A6抗体特异识别, BCA法测定1 L菌液共收获约16.7 mg 蛋白; 将其作用于人乳腺癌细胞MCF-7, MTT显示细胞培养48 h 时, 浓度为100 μg/mL和300 μg/mL 的GST-hS100A6组的D492值较GST组增加29.1%和84.6%(P0.05), 提示S100A6促进MCF-7细胞增 殖; 平板克隆形成实验显示GST-hS100A6组的克隆形成率较GST组高38.7%(P0.05), 提示S100A6 促进MCF-7的克隆形成; Hoechst 染色显示GST-hS100A6组在24 h 时细胞凋亡率较GST组减少 67.8%(P0.05), 48 h 时细胞凋亡率较GST组减少58.4%(P0.05), 提示S100A6抑制MCF-7细胞凋亡; 划痕实验显示在24 h 时GST-hS100A6组的划痕愈合率为GST组的2.2倍(P0.05), 提示S100A6促进 MCF-7细胞迁移; Transwell显示GST-hS100A6组在24 h 时穿膜细胞数较GST组增加88.1%(P0.05), 提示S100A6促进MCF-7细胞侵袭。以上结果显示S100A6对人乳腺癌具有一定的促进作用, 有可能 成为乳腺癌分子诊断的标志物和治疗的新靶标。 关键词 S100A6; 乳腺癌; 增殖; 凋亡; 迁移; 侵袭 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤, 据资料统计, 中的作用及其作用机制提供依据。 其发病率占全身各种恶性肿瘤的7%~ 10%, 全球每 年有120万妇女罹患乳腺癌, 且有50万死于该病。其 1 材料与方法 病因复杂, 受年龄、环境、生活习惯、遗传等多种 1.1 材料 因素影响, 然而其确切机理尚待阐明。 1.1.1 质粒和菌株 pGST-moluc质粒为美 S100蛋白是一组具有EF-手形结构的小分子量 国芝加哥大学医学中心分子肿瘤研究室馈赠, pGST- 钙结合蛋白, 与钙离子及其靶蛋白结合后发挥多种 hS100A6为本课题组前期构建[4], E.coli BL2 1由重庆 生理功能, 例如, 参与细胞增殖和分化、调节钙稳态、 医科大学临床检验诊断学实验室提供。 酶的活性和转录因子等[1] 。已知多个S100成员在肿 1.1.2 细胞株和培养液 人乳腺癌细胞MCF-7购 瘤中异常表达, 并与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭 自中国典型培养物保藏中心, DMEM/HIGH GLU- 和肿瘤转移密切相关[2] 。S100A6是S100蛋白家族成 COSE培养液和胎牛血清购自美国Hyclone公司。 员, 又称为钙周期蛋白(calcyclin, Cacy) 。据文献报 1.1.3 主要试剂 IPTG购自Bio Basic Inc., BCA 道, 在乳腺癌、人子宫内膜癌、肺癌、结直肠肿瘤、 蛋白定量试剂盒购自上海生工, 预染的蛋白质分子 各种类型的皮肤肿瘤以及上皮来源的肿瘤等多种增 量标准购自Fermertans, 丙烯酰胺、还原型谷胱甘 殖旺盛的细胞中, S100A6均高表达[3] 。本课题组研 肽购 自Amresco, Glutathion-Sepharose 4B球珠购 自 究亦发现