响应面分析法优化豆粕固态发酵工艺生产大豆抗氧化肽的研究.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１２）：５９６５ 响应面分析法优化豆粕固态发酵工艺生产 大豆抗氧化肽的研究  陈洁梅 　徐聪聪　常　磊　刘永萍　缪冰旋 （暨南大学生命科学技术学院生物工程学系　广州　５１０６３２） 摘要　分别以总抗氧化活性（ＴＡＯＣ）和多肽含量为评价指标，通过单因素实验分析和 Ｂｏｘ Ｂｅｈｎｋｅｎ响应面分析法对豆粕固态发酵工艺条件进行优化，得到最佳发酵工艺条件为：接种量 ９．６％，料水比１∶０．９，发酵温度３５℃。豆粕在此条件下发酵４８ｈ，其总抗氧化活性与多肽含量分 别由发酵前的２０７．２Ｕ／ｇ和２１．０ｍｇ／ｇ提高到１０９１．１Ｕ／ｇ和３４７．７ｍｇ／ｇ，分别提高了４．３倍和１５．６ ２ 倍，与预测值相比，结果吻合性良好。总抗氧化活性与多肽含量的相关性良好（Ｒ ＝０．８６０４），表 明得到的多肽为抗氧化肽。 关键词　抗氧化肽　响应面分析法　总抗氧化活性　固态发酵 中图分类号　ＴＱ９２０．１ 　　豆粕（ＳＢＭ）是大豆提油后的副产品，其蛋白含量 产周期，降低生产成本，提高豆粕利用率，为大豆多肽 高，必需氨基酸分布合理，是一种优质的植物性蛋白资 的生产开发提供参考。 ［１］ 源 。为了提高豆粕附加值，利用豆粕来生产大豆抗 ［２３］ １　材料与方法 氧化肽的研究已经开始引起人们的注意 。 　　大豆抗氧化肽（ｓｏｙｂｅａｎａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｐｅｐｔｉｄｅ）即大 １．１　材料与培养基 豆蛋白酶解产物，是由一些小分子肽段组成的具有抗 　　豆粕：经粉碎机粉碎，由肇庆市益信农业发展有限 ［４］ ［５］ 氧化活性的大豆低聚肽 ，具有抗疲劳 ，延缓机体衰 公司提供； ［６］ ［７］ 老，调节机体免疫 以及降低胆固醇 等生理功能，是 　　营养琼脂斜面培养基：牛肉膏３ｇ／Ｌ、蛋白胨１０ｇ／Ｌ、 一种重要的功能性多肽。目前国内外大多采用商品酶 ＮａＣｌ５ｇ／Ｌ、琼脂粉２０ｇ／Ｌ、ｐＨ值（７．４±０．２）。 水解大豆蛋白的方法生产大豆抗氧化肽，此方法反应 　　液体种子培养基：牛肉膏３ｇ／Ｌ、蛋白胨１０ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ 条件温和、操作简单，但是由于商品酶制剂成本高昂、 ５ｇ／Ｌ、ｐＨ值（７．３±０．２）。 生产过程中易产生苦味、臭味等原因，从而限制了它的 　　发酵培养基：将５０ｇ豆粕装入２５０ｍｌ锥形瓶中，加 广泛应用［８９］。而微生物固态发酵的方法不但可以克 适量的水混匀，１２１℃条件下灭菌２０ｍｉｎ。料水比根据 服酶解法产品的苦味、臭味等口感差的缺点，而且生产 具体实验设计而定。 成本较低，易于规模化生产，具有重要的理论价值和应 　　菌种：芽孢杆菌ＪＭ３为暨南大学生物工程学系微 用价值，前景广阔［１０１１］。 生物实验室保存菌种。 　　本研究以豆粕为原料，以芽孢杆菌ＪＭ３为菌种，在 １．２　方　法 豆粕固态发酵单因素实验分析的基础上，选择料水比、 １．２．１　豆粕固态发酵单因素实验　在２５０ｍｌ锥形瓶中 接种量和发酵温度为自变量，以总抗氧化活性和多肽 加入５０ｇ豆粕，根据实验设计加入一定比例的自来水混 含量为响应值，采用ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ响应面分析的方法优 合均匀，在１２１℃条件下灭菌２０ｍｉｎ。冷却后接种菌液 化豆粕固态发酵工艺，从而获得最佳发酵条件，缩短生 分别对接种量、料水比和初始发酵温度进行单因素发 收稿日期：２０１２０９２４　　修回日期：２０１２１００８