高效液相色谱法测定小儿感克颗粒中黄芩苷含量.docVIP

高效液相色谱法测定小儿感克颗粒中黄芩苷含量摘要：目的:建立HPLC法测定小儿感克颗粒中黄芩苷的含量。方法：色谱柱为Diamonsil?TM C18(4.6mm×250mm,5μm,流动相为甲醇-水-磷酸（49∶51∶0.2）；检测波长280nm,流速为1.0mL/min.结果：黄芩苷的平均加样回收率为98.6%, RSD为1.3%,重复性试验的RSD为2.0%。结论:本方法简便可靠,结果稳定,重复性好,本方法可用于测定小儿感克颗粒中黄芩苷的含量。? 关键词：高效液相色谱法；小儿感克颗粒；黄芩苷? 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2007）04-0825-02 小儿感克颗粒是由黄芩等6味中药组成的复方制剂,用于小儿感冒发烧,头痛鼻塞,咳嗽喷嚏,咽喉肿痛,其中君药黄芩主要成分黄芩苷具有解毒消炎作用。故建立了用高效液相色谱法测定黄芩苷含量的方法。该法简便、快速、准确。 1仪器与试药 仪器:日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪;LC-10Avp泵;SPD-10Avp可见紫外检测器;浙大N2000色谱工作站;AS3120A超声提取器;METTLER AB135-S十万分之一电子天平(瑞士)。? 试药:黄芩苷对照品(批号110715-200212,由中国药品生物制品检定所提供);甲醇(色谱纯);超纯水;磷酸(分析纯)；小儿感克颗粒(批号060118)。? 2方法与结果? 2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱:ODS柱(4.6mm×250mm,5μm;流动相：甲醇-水-磷酸（49∶51∶0.2）?[1]；检测波长:280nm;柱温:30℃;流速:1mL/min;进样量:10μg。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。? 2.2溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1mL含0.0103mg的溶液,即得。? 供试品溶液的制备：取本品5g,研细,取粉末约0.6g,精密称定,置250mL量瓶中,精密加入70%甲醇200mL,超声提取40min,取出放冷,加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。? 阴性液的制备：按处方制备不含黄芩药材的颗粒,按供试品溶液制备方法制成阴性液,备用。? 2.3方法专属性考察取阴性样品和对照品溶液,在上述色谱条件下测绘HPLC图谱,阴性样品在该保留时间处未出峰,说明处方中的其它成分对黄芩苷的测定无干扰。（见图1～3）? 2.4黄芩苷对照品纯度检查按上述选定的色谱条件,吸取黄芩苷对照品溶液进行分析,以面积归一化法测定。黄芩苷对照品纯度为99.8%。? 2.5标准曲线的制备取上述对照品溶液,分别精密吸取4、8、12、16、20μL，注入高效液相色谱仪,按2.1色谱条件,测定黄芩苷峰面积积分值,以黄芩苷对照品进样量(X)为横坐标,色谱峰面积积分值为纵坐标(Y），绘制标准曲线，计算回归方程：Y=2077864.08X-36347.60,r=0.9999，结果表明,黄芩苷进样量在0.0412～0.206μg范围内线性关系良好。 2.6精密度实验精密吸取同一供试品溶液10μL,重复进样5次,测定其峰面积积分值,结果RSD=1.4%。? 2.7日内及日间误差取同一批样品溶液,在1天内,每隔2h测定1次,共测定5次,计算日内误差RSD=1.7%。再取同一批样品,在4天内,每天取样测定1次,计算日间误差RSD=1.9%。? 2.8重复性试验取前列小儿感克颗粒(批号060118),按供试品溶液的制备方法制备5份供试液,分别测定黄芩苷含量,结果平均含量为3.58mg/g,RSD=2.0%(n=5)。? 2.9加样回收率试验取己知含量的样品(批号060118,含量为3.58mg/g)0.3g,精密称定,精密加入黄芩苷对照品溶液10mL,按供试品溶液制备方法,制备供试品溶液,测定黄芩苷峰面积,计算回收率.结果平均回收率为98.6%,RSD=1.3％(n=5)。见表1 。? 2.103批样品含量测定按供试品溶液制备方法对3批中试样品进行测定,结果样品中黄芩苷含量不低于3.41mg/g。? 3讨论? 提取时间的考察：分别精称小儿感克颗粒0.6g,置250mL量瓶中,精密加入70%甲醇200mL, 分别超声提取20、30、40min?[3],结果30min可提取99.1%,最后确定用70％甲醇超声提取40min的方法，见表2。 因供试品含杂质峰较少,并参照2005版中国药典确定理论板数按黄芩苷计算应不低于3000。 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。 1