新基因CIAPIN的功能研究.doc

附件2 论文中英文摘要格式 作者姓名：李晓华 论文题目：新基因CIAPIN1的功能研究(1)，提示其可能在胃癌MDR中发挥重要作用。 2004年，Shibayama等报道了V62在小鼠体内同源分子Anamorsin的研究。Anamorsin可介导小鼠的前B细胞系Ba/F3抵抗细胞因子IL-3撤除所致凋亡(2)。V62与小鼠Anamorsin在氨基酸序列上有 88 % 的同源性，为不同种属的同源分子。2004年，国际基因命名委员会将该基因统一命名为CIAPIN1，即细胞因子诱导的凋亡抑制因子1，V62亦即获得了正式的命名——CIAPIN1。 目前新基因CIAPIN1的基本生物学功能尚未明确，为了后续实验顺利进行，本实验室于2005年率先在国际上成功制备了CIAPIN1鼠源性单克隆抗体，并申请专利保护。本课题将对CIAPIN1蛋白在人体多器官组织内的表达分布，CIAPIN1基因抗凋亡的机制、与恶性肿瘤发生的关系及如何参与体内复杂的信号转导网络等进行初步探讨，以明确新基因CIAPIN1的基本生物学功能。 【目的】 1、研究CIAPIN1蛋白在人和小鼠发育不同阶段多器官组织中表达分布的特点及趋势，为进一步研究其基本生物学功能提供新的思路和实验依据；2、检测验证CIAPIN1分子的亚细胞定位，为其生物学功的阐明提供重要线索；3、探讨CIAPIN1介导胃癌MDR的机制；4、构建并包装CIAPIN1腺病毒系列载体及病毒，以利于下一步细胞学实验；5、研究CIAPIN1与胃癌发生的相关性；6、筛选CIAPIN1下游效应分子；7、初步筛选CIAPIN1相互作用分子。 【方法】 1、用抗CIAPIN1单克隆抗体，对小鼠出生后P0、P7、P14、P21和P28天心、脑、肝、肾和骨骼肌的组织石蜡连续切片、人孕5个月胚胎多器官组织石蜡连续切片进行免疫组织化学检测；分析CIAPIN1蛋白在成年鼠及成人多器官组织中的表达趋势；2、采用免疫组织化学和免疫荧光检测、EGFP-CIAPIN1融合蛋白表达及亚细胞器分离等方法观察CIAPIN1在多种体外培养细胞系内的亚细胞定位；3、利用体外药物敏感试验、阿霉素蓄积与潴留试验、阿霉素诱导凋亡试验、Western Blot等研究CIAPIN1对胃癌MDR的影响；4、构建CIAPIN1正义及siRNA腺病毒载体，利用包装的腺病毒感染胃癌SGC7901和MKN45细胞系，检测CIAPIN1对胃癌恶性生物学行为的影响；5、利用2-DE和质谱技术鉴定CIAPIN1上调和下调的蛋白质；6、通过基因芯片技术筛选CIAPIN1相关的差异表达基因；7、利用串联亲和纯化（TAP）和质谱技术检测CIAPIN1相互作用分子。 【结果】 1、CIAPIN1蛋白在出生后不同时间点小鼠多器官组织内的表达 在刚出生小鼠P0的心、脑、肝、肾和骨骼肌中，可见不同程度的CIAPIN1阳性免疫反应物，尤其在心肌和骨骼肌中最明显，脑和肾脏次之，肝脏最弱；CIAPIN1阳性反应物主要定位于心肌细胞、骨骼肌细胞，几乎所有的脑细胞、肾小管上皮细胞（主要在髓质肾小管）及部分肝细胞。 总体来看，从P0到P7，CIAPIN1阳性反应物强度在心、脑、肝、肾和骨骼肌中变化逐渐加强。从P7到P14，CIAPIN1阳性反应物在肝、肾、骨骼肌中略有降低；在心肌、中脑和小脑中有增强。从P14到P21，CIAPIN1阳性反应物在心、脑、肝、肾和骨骼肌中变化略有减弱。从P21到P28，CIAPIN1阳性反应物在心、脑、肝和骨骼肌中进一步减弱；此时，随着肾皮质进一步增厚，在髓质和皮质肾小管均可见明显的CIAPIN1阳性反应物，CIAPIN1阳性反应物在肾脏中增加；在这段时期，CIAPIN1阳性反应物在皮质肾小管比髓质肾小管更明显。然而，在3个月大的成年鼠中，CIAPIN1阳性反应物在心、脑、肝和肾小管中的表达强度要低于P28小鼠；但CIAPIN1阳性反应物在成年鼠骨骼肌中较P28小鼠高。 2、CIAPIN1蛋白在人5个月胚胎及成人多器官组织内的表达 在人5月胚胎多器官组织中，CIAPIN1阳性反应物见于心脏、胆囊单层柱状上皮和粘膜、结肠粘膜、小肠粘膜和绒毛、肝脏、直肠腺体、胃粘膜、肾上腺束状带、甲状腺滤泡、脾索、胸腺小叶间隔、皮肤真皮层和汗腺、睾丸白膜和间质、脑组织内神经元和神经胶质、肺小支气管和肺泡、骨骼肌、肾脏皮髓质和肾小管、子宫内膜、胰腺腺泡和胰岛、卵巢、输卵管粘膜等绝大多数组织细胞。与CIAPIN1在5个月胚胎器官组织中的表达水平相比，几乎所有被检测的内、外胚层发育而来的成人器官组织内CIAPIN1蛋白的表达水平相对其5个月胚胎器官组织中的表达水平有不同程度下降，如肝、胰腺、脑、神经系统等；在中胚层发育而来的成人器官组织内CIAPIN1蛋白的表达水平相对其5个月胚胎器官组织中的表达