细胞外铁离子对SH-SY5Y细胞增殖及tau蛋白磷酸化影响.pdfVIP

细胞外铁离子对SH．SYSY细胞增殖及tau蛋白磷酸化的影响 研究生陈戴和 导师王玮教授 中文摘 要 目的研究细胞外铁离子对人神经母细胞瘤系SH．SY5Y细胞增殖的影响。研究 去磷酸化状态下的tau蛋白在SH．SY5Y细胞的表达，初步探讨细胞外铁离子对 tau蛋白磷酸化状态的影响，从而进一步丰富对AD、PD等出现铁蓄积的神经变 性疾病相关发病机制的认识。 方法正常培养SH．SY5Y细胞，予细胞外铁离子溶液(FeCl3)中培养，浓度为 镜下观察细胞形态学改变，应用MTT法，细胞计数法测定铁离子对SH．SY5Y 细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测O．2～O．8mmoI／L的铁离子作用5～10mins 后的细胞周期及凋亡情况，并在电子显微镜下观察正常培养下和O．8mmol／L铁离 子作用10rains后细胞超微结构的变化。采用细胞免疫荧光法检测SH．SY5Y细胞 去磷酸化tau蛋白的表达(应用识别去磷酸化tau蛋白的单克隆抗体tau-1)，并 在激光扫描共聚焦显微镜下应用图像分析系统测量平均荧光强度，观察tau-I在 铁离子作用前后表达情况的变化。所有实验数据以均数±标准差(孑±sd)表示， 采用SPSSl0。0统计软件进行分析，组间差异以方差分析进行检验，P(O．05为差 异显著性。 结果细胞外铁离子对细胞存活有明显抑制作用，MTT法的平均OD值与 细胞存活率随铁离子浓度与作用时间的增大而减少，经统计学分析有显著差异， 呈浓度与时间依赖性。流式细胞术未发现细胞出现凋亡，细胞周期主要位于Gl 期，实验组(32期较对照组高。电子显微镜下显示实验组细胞主要出现坏死改变， 胞浆内出现较大的空泡，次级溶酶体增多．部分细胞出现特征性凋亡改变。 SH．SY5Y细胞表达少量的去磷酸化tau蛋白，主要集中在胞浆，突起中。较低浓 度的铁溶液(如0．2～0．8 均荧光强度降低。 结论铁离子对SH．SY5Y细胞有抗增殖作用，呈浓度和时间依赖性。高浓度铁 离子可导致细胞出现坏死，胞内去磷酸化tau蛋白表达未见增多；低浓度铁离子 不会诱导细胞凋亡，但可导致胞内去磷酸化tau蛋白表达增多，可能与铁诱导的 氧化应激损伤有关。 关键词SH．SY5Y细胞铁离子tau蛋白磷酸化 Theeffectofirononcell andtau inSH—SY5Ycell proliferationphosphorylation Abstract thetoxiceffectsofirononthe andtau Objective：Toexplore proliferation in celland thedatafor the SH—SY5Y phosphorylation provide elucidating ofneurodcgenerativedisease,whichmay the pathogenesis undergopathological ofiron oxidative andironinduced stress． change deposist Methods：Theeffectofawide ofconcentrationsonthe of range ofFeCl3proliferation neuroblastomacellswas MTTmethodand measuredthe by ofthecellswereobservedun