H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒二重PCR检测方法的建立.pdfVIP

• 43 • 中国畜牧兽医 2014 年第 41 卷第 10 期 生物技术 H9 亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒 二重 PCR 检测方法的建立 赵虹1 ，谢芝勋2 ，谢丽基2 ，刘加波2 ，邓显文z ，谢志勤2 ，庞耀珊2 ，范睛2 ，罗思思2 (1.广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530004; 2. 广西壮族自治区兽医研究所， 广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁 53000 1) 摘要:本试验旨在建立一种能同时快速检测 H9 亚型禽流感病毒(avian influenza virus ,AIV) 和鸭坦布苏病毒(duck Tem- busu virus ， DTMUV)的二重 PCR 检测方法。根据 GenBank 中 H9 亚型 AIV 的 HA 基因和 DTMUV 的 NS2 基因序列，分别 设计了 1 对针对 H9 亚型 AIV 和 DTMUV 保守基因序列的引物。利用这 2 对引物对混有 H9 亚型 AIV 和 DTMUV 的 cDNA 模板进行二重 PCR 扩增，得到了 2 个大小与试验设计相符的特异性扩增条带。利用本试验建立的二重 PCR 对其他鸭病病原 体进行 PCR 扩增，结果均为阴性。利用这 2 对引物对 H9 亚型 AIV 和 DTMUV 进行敏感性检测，结果显示最低检测极限分 别为 6. 3 和 6.6 pg。对临床 235 份样品检测的结果表明该二重 PCR 检测方法具有快速、敏感、特异等优点，适用于临床检测 的应用。 关键词 :H9 亚塑禽流感病毒;鸭坦布苏病毒;二重 PCR 文章编号:1671-7236(2014)10-0043-04 中图分类号:Q78 文献标识码:A 鸭坦布苏病毒 (duck Tembusu virus , DT- 方法主要有血清中和试验、琼脂扩散试验和酶联免 疫吸附试验等，但这些方法存在耗时长、敏感性差、 MUV)最早发现于中国的福建、浙江、江苏等东部沿 海主要蛋鸭养殖区，是一种新兴的致病性黄病毒(曾 难标准化等局限性(Cao 等， 2011 ;马秀丽等，2011 ; 婷婷等， 2013) 0 DTMUV 感染鸭后可导致蛋鸭产 谢芝勋等，2013) ，尤其是当这 2 种病毒混合感染时， 更是增加了临床诊断的难度。因此，建立一种快速、 蛋量严重下降，产蛋率可从 90% 下降至 10% 以内， 同时检测 DTMUV 和 H9 亚型 AIV 的检测方法具 甚至绝产;感染雏鸭后可导致雏鸭出现站立不稳、倒 有重要意义。 地不起等神经症状，进而导致雏鸭淘汰率升高，严重 二重 PCR 可以一管二检，具有高通量、低成本、 的甚至高达 80% (Su 等， 2011; Yan 等， 2011 ;李国 高效率等优点(谢丽基等，2012) 。目前，尚未见有应 平，2013) ，给养鸭业带来了严重的经济损失。禽流 感病毒(avian influenza virus , AIV) 属于正蒙古病毒 用二重 PCR 技术对DTMUV 和 H9 亚型 AIV 进行 检测和诊断的报道，本研究设计了 2 对特异性引物， 科 A 型流感病毒属，根据毒力的强弱，AIV 可造成 禽类不同程度的发病和死亡(卢建红等，2003)0 H9 建立了检测 DTM