一步获取基因定点修饰技术测序样品双峰中突变序列方法的建立.pdfVIP

安徽农业科学，lournal of 却muiA伊. Sci.2016 ,44(34):152-153 , 173 簧任编辑李占东责任校对况玲玲 一步获取基因定点修饰技术测序样晶双峰中突变序列方法的建立 赖娅娜1 ，周洲2* (1· 南京医科大学，江苏南京 211166;2 南京师范大学，江苏南京 210023 ) 摘要介绍了一种经济高效获取突变序列的方法。该方法克服了传统的基因定点突变样品~峰测序峰图分析工作量大、操作繁琐、结 果判定周期长等问题，通过与野生型序列的对比分析，判定突变类型，直接获取突变型基因序列，从而为基因定点突变技术中快速筛选、 确定阳性样品及其研究奠定理论基础。 关键词 序列分析;基因定点修饰技术;突变序列 中图分类号 S 188 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611 (2016)34 -0152-02 One Step Analy曲。f Mutation Sequeß(圆 in Two P，锦k Sequencing 副mples Obtained by tbe Site.directed Mutagen筒is 1 20 LAJ Ya.na ,ZHOU Zbou (1. Nanjing Medical Universi句， Nan 吨， Jiangsu 211166; 2. Nanjing Nonnal University , Nanji吨， Jiangsu 21∞23 ) Abstract A quick method to obtain the se甲ence of mutation w圃 mtroduced. 币le traditional sequence ar国lysis method of site.directed gene mutagenesis had the problems such as complicated operation , long restÙt determination cycle and high cost of res咄咄. Mutations in the se- 年lence and the 句pe of mutation could be obtained by direct comparison wi由 the wild type se甲.ence. As a result ，也is method could obviously improve the work efficiency and also provided an economical and efficient se甲lence analysis for the selection of positive samples of gene site mutation technique for researchers. Key words Sequence analysis;四e site-directed mutagenesis; Mutatim 回ψence 近年来，随着 DNA 剪辑技术的快速发展，ZFN、TALENs、 样品中存在序列缺失/增加时，样品峰图在该位点前表现为 Crispr/Cas9 等技术在越来越多的实验室得到运用和开 单一测序峰型，该位点后由于突变造成整段后续序列的移 展[1-5] 。鉴别获取的突变样品表型是否有意义，首先要在目 码，因其与野生型碱基序列不同造成靶位点后均为双峰峰 标基因靶点两端设计引物，进行 PCR 扩增并纯化，然后用 型。因此，操作者要得到突变序列，读取峰图时首先要辨别 PCR 引物或新合成的引物对纯化后的样品进行测序，若结果 特定位点与野生型不同的碱基类型，当单峰因位点与野生型 显示目标靶点附近出现套峰，则判定为 DNA 剪辑技术作用 该位点的碱基类型相同即可直接记录，读到双峰时记录与野 过的样本。若要进一步明确具体的模板碱基改变是否有意 生型不同的喊基型，如此反复逐一记录即可获取靶位点后