伽玛射线对人垂体瘤细胞细胞周期及抑癌基因p16表达影响.docVIP

伽玛射线对人垂体瘤细胞细胞周期及抑癌基因p16表达影响[摘要] 目的：探讨不同剂量伽玛（γ）射线影响人垂体瘤细胞细胞周期和抑癌基因p16表达的变化。方法：采用机械分离法获得稳定生长垂体瘤原代培养细胞株，根据不同照射剂量分为4组照射组，分别接受中心剂量为2、5、8.22、13.33 Gy，设立对照组，剂量为0，照射后用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率，Western Blot法检测p16蛋白的表达变化。结果：对照组和中心剂量2 Gy照射后细胞周期、凋亡率和c-myc蛋白表达无明显差异；中心剂量分别为5 Gy和8.22 Gy时细胞周期G0/G1和G2/M期细胞数量逐渐增多，细胞凋亡率升高，p16蛋白表达增多，与对照组比较，差异均有统计学意义（P 10份标本随机分成1组对照组和4组照射组，每组均有2份标本。照射组根据照射剂量分为照射1~4组，其中照射1组伽玛刀照射中心剂量2 Gy（周边剂量1.5 Gy），2~4组以及对照组的照射中心剂量和周边剂量分别为5 Gy（3.75 Gy）、8.22 Gy（6.0 Gy）、13.33 Gy（10 Gy）和0（0）。 所有标本先在头部MRI（3.0）定位后置于旋转伽玛刀治疗机上照射，照射野为直径4 mm的球体，照射方式为等中心照射，照射深一个射点。照射完毕后部分细胞悬液离心，加入培养液，常规培养48 h，每组2份标本分别进行下一步实验。 1.4 流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率 随机取各组1份标本，消化，离心，弃上清，PBS洗1次，离心，弃上清，用70%冷乙醇固定24 h后用PBS清洗，除去乙醇，加入Rnase（0.5 mg/管），37℃，30 min，冷却，PI染色15 min，暗室放置，应用FACS-scan 440型流式细胞仪, 激发波长为488 nm，发射波长为585 nm，测定前以鸡血红细胞为标准样品，调整仪器变异系数（CV）值13.3 Gy组垂体瘤细胞凋亡率出现下降，同样说明单次照射剂量10 Gy已达到垂体瘤细胞致死剂量，而照射剂量在5 ~10 Gy之间则可引起细胞凋亡，照射剂量 [2]Berckmans B, De Veylder L. Transcriptional control of the cell cycle [J]. Curr Opin Plant Biol,2009,12(5):599-605. [3]Gravina GL, Festuccia C, Marampon F, et al. Biological rationale for the use of DNA methyltransferase inhibitors as new strategy for modulation of tumor response to chemotherapy and radiation [J]. Mol Cancer,2010,9(1):305. [4]Teyssier F, Bay JO, Dionet C, et al. Cell cycle regulation after exposure to ionising radiation [J]. Bull Cancer,1999,86(4):345-347. [5]Marretta RM, Ales F. Cancer cell(s) cycle sequencing reveals universal mechanisms of apoptosis [J]. Mol Cell Biomech,2010,7(4):225-266. [6]Klassen NV, Walker PR, Ross CK, et al. Two-stage cell shrinkage and the OER for radiation-induced apoptosis of rat thymocytes[J]. Int J Radiat Biol,1993,64(5):571-581. [7]Attri J, Srinivasan R, Majumdar S, et al. Alterations of tumor suppressor gene p16 INK 4a in pancreatic ductal carcinoma [J]. BMC Gastroenterol,2005,28(5):22-31. [8]Liang X, Wang P, Gao Q, et al. Endogenous LKB1 knockdown accelerates G(1)/S transition through p53 and p16 pathway