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低龄低体质量小儿外周血干细胞采集体会【摘要】随着外周血干细胞移植(PBSCT)的迅速发展,目前已替代骨髓移植,成为造血干细胞移植的首选方法。由于小儿,尤其是低体质量小儿自身的特殊性,PBSC采集相对困难。我们目前开展的自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病的患儿大多为青少年,其中18例年龄低于6岁体质量低于22KG,均1次采集成功,采集过程中患儿各项生命体征平稳,无严重不良反应。采集后MNC分别达2.29*10??8?/Kg~18.82*10??8?/Kg,CD??34???+?分别达5.09*10??6?/Kg~112.56*10??6?/Kg。? 【关键词】低龄;低体质量;外周血干细胞;采集? doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.08.132文章编号:1006-1959(2010)-08-2109-03 近年来,外周血干细胞移植(peripheral blood stem cells transplantation,PBSCT)得到了迅速发展,目前已替代骨髓移植,成为造血干细胞移植的首选方法。由于小儿个体的特殊性,其外周血干细胞采集与成年人有不同之处,特别是低龄体质量的小儿,PBSC采集相对困难。一方面是PBSC采集过程中,年幼儿的血容量和红细胞压积(Hct)可迅速变化,对血液动力学产生影响;另一方面,采集过程中患儿的配合情况与采集效率等因素将直接干扰PBSC采集??[1-2]?。本中心自2008年7月至2010年4月采用COBE Spectra血液成分分离机共进行18例年龄低于6岁体重低于22KG小儿的干细胞成功动员和采集,现总结报告如下。? 1.对象与方法? 1.1对象:18例患儿年龄2岁~6岁,体质量12Kg~21.5Kg,均确诊1型糖尿病。因患儿年龄小,将治疗方案对患儿的治疗及风险进行如实告知,患儿家属均签字同意行自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病,治疗方案经医院伦理委员会批准。入院后完善各项检查,每日监测血糖,并根据血糖及时调整胰岛素用量。? 1.2主要仪器和设备:COBE Spectra血液成分分离机(Gambro BCT公司),干细胞采集装置管路(Gambro BCT公司),流式细胞仪(FACS,BD公司)。? 1.3外周血干细胞动员方案及采集时机:18例患儿均采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)5~6ug/Kg行干细胞动员,动员第3天始每日监测血常规及外周血涂片检查,根据检查结果计算单个核细胞(MNC)计数及CD??34???+?比率,若MNC计数达到4~6*10??8?/Kg或CD??34???+?1%时,予当天行外周血干细胞采集,(见表1)。? 表118例患儿外周血干细胞动员情况? 1.4外周血干细胞的采集方法:选择PBSC采集程序,按常规方法安装采集管道,输入参数(性别、身高、体重、红细胞压积)。为采集方便,18例患儿采集前均行锁骨上静脉穿刺留置双腔管,连接采集管进行PBSC采集,因患儿体质量均低于22Kg,采集前均使用25Gy的γ射线照射红细胞悬液200ml预充管道,使用ACD-A作为抗凝剂。儿童对抗凝剂较为敏感,易发生枸橼酸钠中毒,在分离过程中控制ACD/全血的比率在1:11~1:13。为预防枸橼酸钠中毒,采集前2~3天口服钙尔奇1片,1次/d。? 1.5外周血干细胞的冻存:采集的干细胞以DMSO配制成冻存液,终浓度为10%,经程控降温后,置于-198℃液氮中保存。? 2.结果? 2.1实验室数据。2例患儿均1次采集成功,(见表2)。? 表218例患儿外周血干细胞采集情况? 2.2并发症。18例患儿采集中有8例出现轻度枸橼酸钠中毒,感口周麻木,因虑到患儿年龄小,未静脉推注10%葡萄糖酸钙,改用口服10%葡萄糖酸钙5ml~15ml后症状缓解。? 3.讨论? 外周血干细胞移植已经广泛运用于临床,能否采集到足够的外周血干细胞是移植成功的前提和关键。由于低龄低体重个体的差异性,在干细胞的采集上与正常人有所不同,PBSC采集更加困难。随着PBSC采集技术的进步,年龄不再是小儿PBSC采集的瓶颈,国外有为5.8Kg婴儿成功采集PBSC的文献报道??[3]?。我们开展的自体造血干细胞移植治疗1型糖尿病的病例中,其中有18例年龄低于6岁,体质量低于22KG,均采集1次就获得足够量的干细胞。? 3.1做好采集前准备工作。采集前应针对小儿的的心理特点,进行适当的心理安慰以减轻其对采集的恐惧感。采集前1周常规口服钙剂,减少采集中低钙的发生。采集前24小时禁食油腻食物,采集当天禁食牛奶,以免出现乳糜血液,干扰机器界面探测值的设定,影响细胞采集。? 3.2静脉插管十分重要。有报道认为60%的A