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循环肿瘤细胞计数在胃癌患者中临床应用[摘要] 目的：探讨胃癌患者循环肿瘤细胞数量，并进行临床评价。方法：将胃癌患者、胃溃疡患者、健康志愿者各50例纳入研究范围，其任何治疗开始前从外周血中收集循环肿瘤细胞（CTCs）进行荧光免疫计数。结果：50例胃溃疡患者及50例健康志愿者外周血中未发现CTCs，胃癌患者CTCs数目为（16.40±8.15）。结论：外周循环血检测循环肿瘤细胞对胃癌患者有普查意义。 [关键词] 胃癌，循环肿瘤细胞 [中图分类号] R730.4[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210（2010）10（c）-142-02 Monitoring circulating tumor cells of blood in gastric cancer WANG Liquan, WANG Yuhua, CUI Jinbei （Weifang People’s Hospital, Weifang 261041, China） [Abstract] Objective: To monitor circulating tumor cells of bloodin gastric cancer. Methods: 50 cases gastric cancer, 50 cases gastric ulcer patients and 50 healthy volunteer. All CTCs were identified by immunofluorescence and the number of CTCs was calculated in different study objects． Results: There was no CTCs found in 50 healthy donors and 10 gastric ulcer patients． The number of CTCs in gastric cancer was (16.40±8.15). Conclusion: The CTCs can be found in gastric cancer patients． [Key words] Gastric cancer; Circulating tumor cells (CTCs) 胃癌是一种严重威胁人民身体健康的疾病，可发生于任何年龄，但以40～60岁多见，男多于女（约为2:1）。血行播散是肿瘤转移的重要途径，肿瘤细胞可以通过血液循环抵达任何组织和器官，随着肿瘤细胞的不断增殖，部分细胞失去相互附着的能力从肿瘤母体脱离，降解、浸润周围组织进入到血液或淋巴系统中。这些自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞被称为CTCs[1-3]。 1 材料与方法 1.1 研究对象 2009年8月～2010年3月在潍坊市人民医院就诊的胃癌患者50例，胃溃疡患者50例，健康志愿者50例，其中，男性98例，女性52例，平均(47±13)岁，各组间性别、年龄无明显差异。 1.2 实验方法 1.2.1 标本采集及核细胞提取清晨空腹采集确诊胃癌患者、胃溃疡患者、健康志愿者静脉血各10 ml；加入淋巴细胞分离液，密度梯度离心方法分离单个核细胞。 1.2.2 免疫磁性微珠制备[4,5]磁珠经60Co照射灭菌，加HAbl8，磁场中除上清，除去未结合的单抗，PBS封闭磁珠，4℃保存备用。 1.2.3 单个核细胞的免疫磁性标记[6-8]按照每10 ml血标本加入300 μl免疫磁珠的比例，将标本分离所得的单个核细胞与磁珠混匀，4℃孵育30 min，用分离缓冲液制成1 ml细胞悬液备用。 1.2.4 免疫磁性分离将标记的细胞悬液通过磁性分离柱，并用缓冲液冲洗柱子；将磁性分离柱从磁场中移开，用稀释缓冲液洗脱柱内细胞；将收集的细胞液离心后加入缓冲液1 ml，光镜下细胞计数，取3个视野的平均值，计算外周血中癌细胞的浓度。 1.3 统计学方法 本研究采用SPSS 13.0软件对数据进行分析，以P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 50例胃溃疡患者及50例健康的志愿者外周血中未发现CTCs，胃癌患者CTCs数目为（16.40±8.15）。 3 讨论 随着纳米技术扩展应用，纳米免疫磁珠为肿瘤细胞生物诊断技术提供了分离手段，其原理是基于细胞表面抗原以及某种蛋白与连有免疫磁珠的特异性单抗相结合，外加磁场后通过抗体与免疫磁珠相连细胞和蛋白吸附而滞留在磁场中，由于免疫磁珠表面的单抗只结合含有特异性抗原的细胞和蛋白，从而达到与其他种类的细胞和蛋白相分离的目的。此种分离技术将抗原抗体反应的高度特异性和免疫磁珠的富集分离作用相结