聚丙烯酰胺杂化凝胶的制备与其固定化甘油脱氢酶的分析研究.pdfVIP

摘要 摘要 生物基l，3一丙二醇是制备聚对苯二甲酸丙二醇酯的天然可再生资源，在地毯、工程塑 料、服装面料等领域应用广泛。本论文主要围绕如何制备同定化多酶体系及利用其催化甘油 生产l，3．丙二醇展开探讨，主要研究内容如下： l、采用沉降法研究不同分散剂对超细Ti02粉末水溶液分散性能的影响，结果显示分散 剂分散效果强弱依次为：甘油聚乙二醇辛基苯基醚(曲拉通X．100)乙二醇烷基酚聚氧 乙烯醚(OP．10)。 2、以Ti02／PAM无机一有机杂化凝胶为载体，吸附．絮凝法圃定模型蛋白木瓜蛋白酶，并 利J{j上E交设计法找出最佳负载上艺。结果显示，L司定化过程中，影响负载最因素显著顺序依 次为：l矗l定pH给酶量吸附时间固定温度PAM掺杂量；同定最佳工艺条件为：先在含 O．2 min， gTi02的纳米凝胶中加入30mg木瓜蛋白酶，在35℃pH=8．0环境条件F先吸附10 再加入O．2 PAM絮凝30min，此时负载率最高可达97．36％。 mg *tl干1-Jt]机制。结果显示：Ti02与木瓜蛋白酶在最适合的pH范闱内，静电吸附在l司定过程中 起主要作用，其粒径在444nm附近，结构疏松多孔，比表面积比较大，且酶分子在载体中 分布均匀，没有明显团聚现象。 4、选用克雷伯杆菌为粗酶制备的菌种来源，确定粗酶提取的步骤依次为：先增殖培养， 离心收集菌体；洗涤并称重，加入生理盐水混匀，冰浴环境下超声波破碎、高速冷冻离心后 获得粗酶液，再经饱和度50-55％的硫酸铵分级沉淀及透析脱盐，最后用pH=7．o~8．0的 Tris—HCI缓冲溶液配制成多酶溶液，并4℃冰箱保存。 5、利用Ti02／PAM作为I司定载体，吸附．絮凝法共同定克雷伯杆菌粗酶中的甘油脱氢酶、 甘油脱水酶及1，3．丙二醇氧化还原酶，并探讨游离酶和固定化多酶体系的酶学性质和酶促 动力学。结果表明：固定最适宜pH为7．5，温度为37℃，此时酶的最人负载量和相对酶活 可达到104．1 mg／g和95．36％。同定化多酶体系热稳定性和酸碱稳定性都较游离酶有一定的 提商，储存稳定性也较好。对比游离酶和l爿定化酶的动力学分析表明辅因子NAD(H)再生可 行，且利用制得的固定化酶催化转化甘油产l，3．丙二醇，反应10h后，l，3一丙二醇产率最 mmol／L。 高达到126．3 关键词：1，3一丙二醇，无机．有机杂化凝胶，甘油脱氢酶，吸附．絮凝，辅冈子再生，酶 促动力学 ABSTRACT ABSTRACT is bio-basedbulkchemicalswhichhasbeenusedasmonomerto 1，3-propanedioitypically thatcallbeusedin isa material producepolytrimethyleneterephthalate(P下r)．PTTpromising andother thesisfocusesonthe resins films，filaments，engineeringapplications．This preparation ofimmobilized andits in multi-enzymesystem catalyticapplicationproducingl，3-propanedi01． The contentsofthethesisareasfollows： major on of Was 1．Theeffect