口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

中 国 人 兽 共 患 病 学 报 380 9 () seJournalofZoonoses 2013 29 4 Chine ! DOI10.3969CZ..issn.1002 2694.2013.04.013 口蹄疫病毒一步法 Ta Man- 荧光定量 MGB -PCR检测方法的建立 RT ! 1 2 3 1 1 2 2 2 李金 海 ! ! ! ! ! ! 李兴 玉 曹三杰 文心 田 陈 斌 张 毅 周 哲 学 ! \ \ \ ( ) 检测方法 D方 摘 要 目的 建 立 一种 能快速 高 效 敏 感 特异地 检测 口蹄疫病毒 F 的一 步 法 荧光定 量 R MDV RT-PC 法 根 据 基因 序列 比对结 9 3 9 3 FM 聚合 酶 D 果 设计 特异性 引物和 探 针 通 过 优 化 得 到 最 佳 反 应 体 系和 反 应 条 件 分 DV 3 MGB 9 3 \ \ D \ 型 \ 别以 质粒 和病毒 RNA 为模 板 构 建标 准曲线 并进行特异性 敏 感性 重复性试 验 结果 该方法 能特异性 检 测 A 型 O 9 \ \ \ \ \ 3 A 型 MDV 而对猪 瘟 猪 蓝耳 病 猪 圆环病毒 猪 细 小 病 毒 猪 狂 犬 病 毒 猪 乙 型 脑 炎 等 病 原 检 测 结 果均 为 阴性 构 建 的 sia1 F 9 / 9 测病毒 荧光定量标 准曲线 值 与模 板 浓度呈 良好 的线 性 关系 检测 质粒 的敏 感性可 达 o ies L 检 RN 的敏 感性可 达 Ct 83.4cp $ A / 9 3 9 D 比 多重 敏 感 性高 倍 对 份样 品进行 次批 内和 批 间重复检测 检测结果 变 异 系数 均小 于 结 论 7.1f L -PCR