口蹄疫病毒实时定量RT-PCR方法的建立及初步应用.pdfVIP

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2017-09-03 发布于北京
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口蹄疫病毒实时定量RT-PCR方法的建立及初步应用.pdf

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口蹄疫病毒实时定量RT-PCR方法的建立及初步应用.pdf

第 36 卷第3 期中国预防兽医学报 Vo 1. 36 ,No.3 Mar. 2014 2014 年 3 月 Chinese Joumal of Preventive Veterinary Medicine doi: 10.3969/j .issn.1008-0589.2014.03.12 口蹄疫病毒实时定量 RT-PCR 方法的建立及初步应用胡骑，何于雯，信爱国\李华春* (云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒重点实验室，云南昆明 650224) 摘要:为分析口蹄疫病毒(FMDV)在细胞培养物中的复制动态，本实验以 18S rRNA 为内参基因，建立检测 FMDV3D 基因的 SYBR Green 1 实时定量 RT-PCR (qRT-PCR)方法，以双标准曲线法分析细胞总 RNA 中 FMDV 基因组当量(GE悦目的方法，结果表明所建立的 qRT-PCR 方法最小检出量为 1015 TCIDsJO.l mL，模板稀释度在 7 范围内呈良好的线性关系，与其他病毒无交又反应。应用该方法测定了亚洲 10 l 型 FMDV 兔化弱毒 ZB仰的株和方法进行了比较。结果显示其体外拯救病毒vZB 株的感染细胞后的复制动态，与 TCID ZB(a忧)和 vZB 在 4h 测 50 田 217 2 1 定病毒 TCID 10. TCIDsJO.l mL和 10. ∞ TCIDsJO.l mL，细胞悬液内病毒 RNA 水平分别为 10 GE/附和分别为 50 517 但 533 101 GE/μgj 至 24 h ，细胞均产生 100 % CPE ，病毒 TCID 10. TCIDsJO.l mL和 10. TCIDsJO