多年生黑麦草多基因遗传转化体系的建立与优化.pdfVIP

2014 年 1 月 第 36 卷第1 期 中国草地学报 Vo l. 36 No. 1 Chinese ]ournal of Grassland ]an. 2014 文章编号:1673-5021(2014)01-0013-05 多年生黑支草多基因遗传转化体系的建立与优化 麻冬梅l ，郭林娜2 ，金凤霞l ，李会文2 ，许 兴l (1.宁夏大学农学院，宁夏 银)11 750021;2. 宁夏大学生命科学学院，宁夏 银川 75002 1) 摘要:以多年生黑麦草品种玲珑的愈伤组织为受体材料，建立了适用于农杆菌介导的转基因组织培养体系，并 对耐盐相关基因 5051 、 5052 、 5053 、 CBL1 0 和 BAR 基因进行转化。结果表明，以成熟种子作为外植体诱导胚性愈 伤的最佳培养基为 MS+7mg/L 2 ， 4-D十500mg/L 水解酶蛋白，最佳分化培养基为 2. Omg/L 6-BA+0. 2mg/L 2 ,4-D; 愈伤筛选和再生苗筛选的最佳除草剂浓度为 5mg/L PPT; 筛选出的最佳侵染时间为 20min ，共培养时间为 2d ，建立 了多年生黑麦草有效的遗传转化体系。 关键词:多年生黑麦草;遗传转化体系;农杆菌 中圈分类号:S543.6 文献标识码:A 多年生黑麦草CLolium perenne L. )是一种世 子置于不同激素配比的诱导愈伤组织培养基中，温 界范围内具有栽培意义的禾本科牧草和草坪草川， 度 25 士 2C ，暗培养 l 周后去芽以诱导形成愈伤组 它具有生长快、分囊多、耐牧、成坪速度快等优点时， 织，4 周后挑取愈伤组织于继代培养基中，每 2 周继 但对环境的要求极高，干旱、土壤盐碱化、高热和严 代培养 1 次。愈伤组织继代培养 6 周后，挑取浅黄 寒都会影响生长，限制了其栽培和利用[巧。而改变 色、紧密、颗粒状胚性愈伤组织于分化培养基光下培 养，光照强度 2000~3000Lx，光照周期 16h/d ，温度 复杂的环境因素是非常困难的，要解决这些问题最 25~280C ， 1 个月后统计愈伤组织分化率。 经济有效的方法就是培育抗旱、耐盐碱的黑麦草新 1. 2. 2 愈伤组织除草剂筛选浓度的确定 品种。基于传统育种于段对草坪草性状的政良己有 配制含 1mg/L、 2mg/L、 3mg/L、 4mg/L、 5mg/L 明显进展，但也越来越显示出改良的局限性。近年 来，通过基因工程育种来改良草坪草的抗逆性已成 PPT 的愈伤组织继代培养基，将外植体分别接入各 梯度培养基中，2 周后统计。 为本研究领域的热点。国内外转基因牧草及草坪草 1. 2. 3 不同侵染时间对转化的影响 育种研究也取得了明显进展川，许多禾本科牧草和 将继代培养 6 周后的浅黄色、紧密、颗粒状胚性 草坪草的再生和转化体系已经建立起来，但有些物 愈伤组织移至适宜浓度