固氮链霉菌Streptomyces chartreusi WZS021接合转移系统的建立及优化.pdfVIP

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2017-09-03 发布于北京
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南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2017 ，48 （4 ）：581 586 ISSN 2095 1191 ； CODEN NNXAAB http ：// DOI ：10.3969/j.issn.2095 1191.2017.04.003 固氮链霉菌Streptomyces chartreusi WZS021 接合转移系统的建立及优化 1 1 1 1 1 1，2 * 1，2 * 王震，庞妃，顾彩彩，王露蓉，邢永秀，杨丽涛，李杨瑞 1 2 （广西大学农学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004 ；广西农业科学院甘蔗研究所/ 中国农业科学院甘蔗研究中心/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室，南宁 530007）摘要：【目的】建立和优化固氮链霉菌Streptomyces chartreusi WZS021 （简称菌株WZS021 ，下同）的接合转移体系，以丰富固氮链霉菌基因片段转移技术。【方法】以大肠杆菌Escherichia coli ET12567 （pUZ8002 ）为供体菌，携带整合型质粒pSET152 的菌株WZS021为受体菌，进行菌株WZS021接合转移。【结果】选择高氏一号培养基为菌株WZS021接合转移培养基，50 ℃热激 10 min，供受比为1∶10，涂布20.0 mg/L安普霉素、接合转移 12 h后覆盖抗生素，添加MgCl2终浓度 6 为5.0 mmol/L 时接合转移效率最高，达3.24× 10 。【结论】通过确定适用于菌株WZS021接合转移条件建立的菌株 WZS021遗传转化体系，有助于今后插入标记基因确定该菌的固氮定殖位点及导入外源基因的操作。关键词：固氮链霉菌WZS021 ；接合转移；优化； pSET152 中图分类号： Q939.113 文献标志码：A 文章编号：2095 1191（2017 ）04 0581 06 Establishment and optimization of Streptomyces chartreusi WZS021 transconjugation system 1 1 1 1 1 WANG Zhen ，PANG Fei ， GU Cai cai ，WANG Lu rong ，XING Yong xiu ， YANG Li tao1，2 * ， LI Yang rui1，2 * （1