多重PCR技术检测儿童急性呼吸道感染DNA病毒方法的建立与应用.pdfVIP

1310 实用预防医学 2014 年 11 月第21 卷第 11 期 Pract Prev Med ,Nov. 2014 ,Vol. 21 ,No. 11 ·论著· 多重 PCR 技术检测儿童急性呼吸道感染 DNA 病毒方法的建立与应用 曾跃红，田海清，王新华，周勇军 益阳市中心医院，湖南益阳 413000 摘要: 目的 建立多重 PCR 技术检测儿童急性呼吸道感染 DNA病毒的方法，以便及时监测并快速诊断急性病毒性呼 吸道感染。 方法 参照 NCBI 数据库病毒核酸序列设计多重 PCR 引物，优化反应条件，并对 392 份儿童呼吸道标本进 行检测，验证多重 PCR 反应的敏感度及特异性。 结果 采用多重 PCR 引物对人博卡病毒(hBOV) 、 KI 多瘤病毒(KI)、 腺病毒(AdV) 、 wu多瘤病毒(WUPyV) 、人细小病毒B19(HPVB19)5 种 DNA病毒进行扩增，分别获得 404、 324 ， 248、 77、 128 bp 片段，均无非特异性扩增条带，与设计相符;392 份儿童呼吸道标本多重 PCR 扩增出 190 阳性标本，阳性率为 48.46% (190/392) , 6 个月 -3 岁以内婴幼儿阳性率 70.00% (1 12/160) 为最高。 结论 本研究初步建立了应用多重 PCR 技术快速检测儿童呼吸道标本中 DNA病毒敏感性、特异性好的方法，6 个月 -3 岁以内婴幼儿检出率高。 关键词: 呼吸道感染; DNA病毒;多重 PCR; 儿童 中固分类号:R，斜6.7 文献标识码:A 文章编号:1伽-3110(却14)11-1310-04 ∞1[: 10. 3969/j. ÏS5n.1伽-3110.2014.011.010 Detection and identification of DNA viruses in the specimens of children with acute respiratory infection by multiplex PCR assay ZENG Yue- hong , TIAN 1-也i - qing , WANG Xin - hua , ZHOU Yong - jun The Central Hospiωl 0/ Yiymg City , Yiymg , Hunan 413000 ， αzna α附5阳uling author: ZHOU Yong - jun , E-mail: 840821220战 Abstract: Objective To develop a multiplex PCR assay for detection of DNA viruses in specimens of children with acute r，卧 piratory infection so as to timely monitor and rapidly diagnωe acute viral respiratory infection. Meth创Is The primers w臼E designed based on the NCBI 段quence genomes analysis of the viruses , and then the reaction ∞nditions were optimized. 392 chil dren s respiratory specimens were su问ected to detection of DNA virus to validate the sensitivity and specificity of the multi