多重荧光 RT-PCR同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒方法的建立.pdfVIP

中国人兽共患病学报 2011. 27 (4) Chinese J ournal of Zoonoses 311 文章编号: 1002-2694(2011 )04 - 0311- 05 多重荧光 RT-PCR 同时检测 GI 型 和 GII 型诸如病毒方法的建立骨 纪 蕾，韩建康，吴晓芳，徐德顺，邱好怡，陈莉萍，沈月华，查赞峰 摘 要:目的 建立可同时检测 Gl 型和 Gll 型诺如病毒的双重荧光 RT-PCR 快速检测方法，并应用于临床标本的检测。 方法 使用针对 GI 型和 Gll 型诺如病毒各亚型代表株保守序列设计的特异性引物和 TaqMan 探针，通过调整引物、探针浓度 优化最佳反应条件，建立一步法荧光 RT-PCR 快速检测反应体系。对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行评估，并对临床粪 便标本进行检测，与已有的单重荧光 RT-PCR 方法进行比较。结果 实验结果表明，该检测方法特异性强，对 GI 型、GII 型诺 如病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒进行检测，均无交叉反应g 对 GI 型和 GII 型诺如病毒核酸的最低检出限分别可 达 !pg/mL 和 !Opg/mL. 并且重复性好;对 101 份临床标本分别用已有的单重荧光 RT-PCR 和本文建立的多重荧光 RT-PCR 进行检测，结果显示本文建立的多重荧光 RT-PCR 方法对 GI 型诺如病毒的检测能力优于前者。结论 本研究建立的多重荧 光 RT-PCR 方法能同时对 GI 型和 GII 型诺如病毒进行快速检测，并且灵敏度高，特异性好，可用于感染性腹泻暴发中诺如病 毒的快速检测。 关键词:诺如病毒;多重荧光 RT-PCR; 检测 ;GI 型 ;GII 型 中图分类号:R373.2 文献标识码:A Simultaneous detection of Norovirus genogroup 1 and 11 by mu Itiplex real-time RT-PCR JI Lei , HAN Jian-kang. WU Xiaσfang.XU De-shun.QIU Yu-yi.CHEN Li-ping.SHEN Yue-hua.CHA Yun-feng (Huzhou Center for Di .lease Control and Prevention. Huzhou 313000. China) ABSTRACT: The purpose of this study was to develop a multiplex real-time RT-PCR assay for rapid and simultaneous de- tection of norovirus genogroup 1 and genogroup II. and apply it to the detection of norovirus in clinical specimens. Specific primers and TaqMan probes werc designed according to the conserved sequence of GI and GII norovirus respectively. The one- step real time RT-PCR reaction system was established by optimizing the best reaction conditions and adjusting the concentra- tion of primers and probes. The sensitivity. specificityand stability of the multiplex real time RT-PCR assay was estimated and the assay was further vali