人Tau基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达-南方医科大学学报.PDF

2012;32(2) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·185 · 基础研究 人Tau 基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达 1 2 1 1 1 1 1 孙海涛 ，杨化强 ，杨璐军 ，李正阳 ，杜谋选 ，陈宇新 ，姜晓丹 1 南方医科大学广东神经外科研究所//珠江医院神经外科//广东省脑功能修复与再生重点实验室// 国家临床重 2 点专科，广东 广州 510282 ；中国科学院广州生物医药与健康研究院华南干细胞与再生医学重点实验室，广 东 广州 510530 摘要：目的构建含人Tau 多表位肽段基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达并纯化目的蛋白，检测Tau 多表位DNA 疫苗 免疫小鼠后特异性抗体产生情况。方法 以质粒pVAX 1-Tau 为模板，用PCR 扩增人Tau 多表位肽段基因，插入表达载体 pGEX-4T-2 中，构建原核表达质粒pGEX-4T-2-TauP1/P2。将鉴定后的阳性重组质粒转入E.coli BL21（DE3）中，经异丙基-β-D- 硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，并采用GST 法纯化、SDS鉴定目的蛋白的表达。以TauP 1/P2 DNA 疫苗免疫小鼠获 取血清，Dot-blot 检测TauP 1/P2 特异性抗体产生情况。结果 PCR 扩增出约300 bp 的基因片段，克隆至表达载体后，经酶切和测 序验证正确；获得了纯化的目的蛋白，并证实了GST-TauP1/P2 融合蛋白的表达。Dot-blot 检测到特异性TauP 1/P2 抗体的产生。 结论 成功构建和表达人Tau 多表位肽段基因的目的蛋白GST-TauP1/P2 ，能够识别Tau 多表位DNA 疫苗免疫后小鼠产生的特 异性TauP 1/P2 抗体。 关键词：Tau ；质粒；原核表达；融合蛋白 中图分类号：Q78 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）02-0185-04 DOI: CNKI:44-1627/R1413.018 /kcms/detail/44.1627.R1413.018.html Construction of a prokaryotic expression vector of human tau multi-epitope peptide and immunogenicity of the expressed product 1 2 1 1 1 1 1 SUN Haitao , YANG Huaqiang , YANG Lujun , LI Zhengyang , DU Mouxuan , CHEN Yuxin , JIANG Xiaodan 1Neurosurgery Institute, Key Laboratory of Brain Function Repair and Regeneration of Guangdong Province; Department of Neurosurgery, Zhujiang Hospital, Southern Medical University; Key Clinical Specialty, Guangzhou 510282, China; 2Key Laboratory of Regenerative Biology, South China Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Guangzhou Institute of Biomedicine and Health, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510530, China Abstract: Objective To construct a pro