Galectin-9和其受体Tim-3在哮喘小鼠肺组织中的表达和作用.pdfVIP

摘 要 Galectin．9及其受体Tim．3在哮喘小鼠 肺组织中的表达及作用 硕士研究生：张志英 导 师：栾斌 专 业：儿科学 郑州大学第三临床医院 河南郑州450052 摘 要 哮喘是一免疫失衡性疾病，UPT淋巴细胞控制着炎症反应，Thl／Th2反应性 失衡，Th2型细胞免疫应答异常增高，Thl型细胞免疫应答减弱在哮喘的发病过 程中起着关键作用，此平衡失调被认为是哮喘发病的重要机制。糖皮质激素的 应用巨大的改变了哮喘患者的临床症状及生存质量，成为支气管哮喘治疗的经 典用药。然而，长期应用尤其在大剂量应用时具有明显的毒副作用；对少数重 症哮喘患者可能存在对糖皮质激素治疗不敏感或是抵抗。因此人们一直为更有 效的治疗哮喘寻求新突破，在变应性疾病中半乳糖凝集素一9(Galectin．9)和T细 胞免疫球蛋白粘蛋白分子一3(Tim一3)在转录水平和蛋白水平都有明显升高，并 且其改变与Thl／Th2细胞因子含量有直接关系，它们与变应性炎症过程密切相 作为免疫调节的靶分子，通过免疫调节使哮喘中Thl／Th2反应失衡恢复平衡，以 期能为哮喘发病机制研究与临床治疗提供理论和实验基础。 目 的 本实验通过建立小鼠哮喘模型，探讨Galectin．9及其受体Tim．3在哮喘小鼠 肺组织中的表达及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR．Y)激动剂罗格列酮 及Tim．3对Thl／Th2平衡的影响机制。 摘要 材料和方法 1 动物分组和模型制作方法 动物中心。按随机数字表法分为哮喘组、对照组、ROS干预组，每组各15只。哮 (10mg／kg)，持续1周；对照组用等量生理盐水致敏和雾化吸入，余同哮喘组。 卵蛋白、罗格列酮液每次现配现用。 2标本处理 血清收集：末次激发后24h内，无菌条件下眼球动脉取血，收集外周血O．8ml 进行麻醉，迅速开胸，暴露肺脏，观察肺脏大体改变，取左侧肺组织，快速放 于液氮中冻存，留作PT—PCR实验用。然后经右心室插管至肺动脉，用生理盐水 冲洗后取右肺中叶，置于4％的多聚甲醛溶液中固定24h，依次酒精梯度脱水，常 规石蜡包埋，做厚度约51am切片，行HE染色后，光学显微镜下观察肺组织、各 级支气管及血管周围炎症细胞的浸润情况。 3 ELISA检测血清中IL一4及IFN．Y含量 实验过程严格参照试剂说明书进行， 加终止液混匀后立即由自动酶标仪测 定吸光度01)450值，以OD值为纵坐标，标准品为横坐标，绘制标准曲线，据 样品的OD值确定其浓度。 4 RT．PCR 将液氮冻存的左肺组织用Trizol一步提取法提取总RNA，并反转录成eDNA， Scan 设计引物扩增目的片段。扩增后进行琼脂糖凝胶电泳，用Band 5．0凝胶分 Tim一3与内参GAPDH的比值作为该小鼠的代表值。 H 摘要 5统计学方法 应用SPSSl6．0统计软件包进行数据分析，计量资料用均数±标准差(i±5) 表示。多个样本均数的比较采用单因素方差分析，两两比较用LSD．t检验；各 因素间相关性采用Pearson相关分析，以P0．05为差异有统计学意义。 结果 1病理学改变 小鼠肺组织切片HE染色显示：对照组肺组织结构完整，气管形态规则，粘 膜上皮完整，各级支气管、肺泡、血管周围未见有炎症细胞浸润，肺泡形态规 则，各支气管平滑肌未见增生，支气管腔内仅有少量分泌物。哮喘组小鼠肺组 织切片可见肺内支气管粘膜下及血管周围有较多EOS浸润，粘膜下充血水肿，粘 液腺增生，气道上皮细胞的脱落和上