GM-CSF及BZLF1融合基因重组腺病毒表达载体的构建.pdfVIP

GM．CSF和BZLFl融合基因重组腺病毒表达载体的构建 摘要 目的 将人粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(GM．CSF)编码基因与EB病毒 (EBV)即刻早期基因(BZLFl)进行融合，构建融合基因的重组腺病毒表达载体， 旨在发挥融合基因编码产物GM．SCF增强抗肿瘤免疫，以及BZLFl诱导潜伏期EBV 进入裂解期复制的作用，为协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞提供实验基础和理论依据。 方法 逆转录．聚合酶链反应分别获得目的基因GM．CSF和BZLFl编码序列的 extension，SOE)技术将两段基因通 cDNA，采用剪接式重叠延伸(splicedoverlap BJ5183中完成 基因BZGM定向亚克隆-至pAdTrack．CMV穿梭质粒，在原核细胞晟cold 穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy．1的同源重组，构建融合基因BZGM真核表达载体 pAd．BZGM。经抗生素培养板筛选重组体，然后转染293细胞，获得复制缺陷型重 组腺病毒vAd．BZGM。RT．PCR和Western blotting鉴定重组腺病毒感染人鼻咽癌CNE 细胞的情况；M1]嗽检测腺病毒感染CNE后细胞的增殖情况。 结果 基因BzGM重组腺病毒表达载体pAd．BZGM，测序鉴定结果表明序列正确无误。③ @Western 因和EBV早期基因BMRFl表达，表明该融合基因能够诱导病毒从潜伏期进入裂解增 殖期。⑤M嗽检测显示重组腺病毒感染CNE细胞后抑制细胞增殖的作用与所设对 照组比较差异具有统计学意义(P0．05)。 内稳定表达目的基因，可有效诱导潜伏状态EBV进入裂解期复制，进而抑制细胞的 增殖，为进一步探讨BZGM的功能奠定了实验基础。 硕士研究生：崔瑛(临床检验诊断学) 指导老师：刘成玉教授罗兵教授 关键词：疱疹病毒4型，人；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；基因，即 早；基因融合；遗传载体 Constructionofrecombinantadenovirus vector expression GM-CSFandBZLFI carrying gene Abstract Thehuman factor 0bjective granulocyte—macrophagecolony—stimulating EBV andthe immediate fusedto (GM-CSF)geneencoding earlygenes(BZLFl)were BZGM constructBZGMrecombinantadenovims vectorand gene．To expression toplay the fusion GM··CSF anti··tumor andBZLFl genecodingproducts enhancing immunity latent EBVtolytic constructionofBZGMrecombinant inducing replication．The adenovirus vectorcould all foundatio