MDM2P53通路在糖尿病心肌病中的作用和机制研究.pdfVIP

目 录 1 MDM2/ p53 通路在糖尿病心肌病中的作用及机制研究„„1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„8 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„19 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„38 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39 3 MDM2/p53通路与心血管疾病的研究进展 （综述）„„„„40 MDM2/ p53 通路在糖尿病心肌病中的作用及机制研究 摘 要 目的：糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy ，DCM)是糖尿病 （Diabetic mellitus ，DM ）最常见的并发症之一，是糖尿病患者致残、 致死的重要原因。糖尿病心肌病主要的发病机制包括心肌细胞代谢障 碍、微血管病变、心脏自主神经病变及胰岛素抵抗等导致的一系列病 理改变。其主要的病理表现为心肌细胞肥大、心肌肥厚、心肌间质纤 维化以及心肌细胞的凋亡等。临床表现早期为心脏的舒张功能受损， 逐渐出现收缩功能障碍，最终可导致心力衰竭。目前研究认为MDM2 （Murine double-minute 2 ，鼠双微粒体蛋白2 ）和可通过一些途径对 糖尿病心肌病产生影响：如 MDM2 可以抑制心肌肥厚；p53 可以促 进心肌细胞凋亡等等。MDM2 与p53 之间构成降解-反式激活循环通 路: MDM2 通过使p53 泛素化导致p53 降解，而p53 反式激活因子诱 导MDM2,消除反馈循环。研究MDM2/p53 与糖尿病心肌病发病机制 中的关键环节心肌肥厚、心肌细胞凋亡之间的关系，通过干扰两者之 间的反馈循环，使p53 蛋白表达降低，从而使心肌纤维化、心肌肥厚 及心肌细胞凋亡的发生发展受到抑制，这可能是糖尿病心肌病很有希 望的治疗方式。故本实验以链脲佐菌素（Streptozotocin ，STZ ）腹腔 注射建立糖尿病心肌病大鼠模型，探讨 MDM2/p53 通路在糖尿病心 肌病中的作用及机制。方法：1、模型的建立及分组：将25 只健康雄 性 Wistar 大鼠适应性喂养一周后, 随机分为正常对照组(Normal control，NC 组) 10 只和糖尿病组(Diabetes mellitus, DM 组) 15 只。DM 组大鼠一次性腹腔注射STZ 60mg/kg，NC 组大鼠予以等剂量的枸橼 1 酸缓冲液。所有大鼠均以原饲料继续喂养8 周。2 、心脏采血测定空 腹血糖。3、心脏采血后迅速取出心脏,用等渗盐水洗净,滤纸吸干,称 心脏重量,计算左心室重量指数。4 、HE 染色和Masson 染色：取左心 室游离壁组织,常规固定,石蜡包埋，观察心肌细胞大小及心肌纤维化 情况。5、透射电镜观察心肌超微结构的变化。6、TUNEL 法检测心 肌细胞凋亡指数。7 、蛋白免疫印迹(Western-blot) 法检测心肌组织 MDM2 、P53 蛋白表达。8、统计学处理：应用SPSS17.0 统计软件统 计分析，数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用独立样本均数 ¯ t 检验，相关指标之间采用直线相关分析，检验水准α=0.05 ，P0.05 表示有统计学意义。结果：1、大鼠一般情况指标：⑴血糖：DM 组较 NC 组血糖升高(P0.0 1) 。⑵体重：DM 组较 NC 组体重明显减轻 (P0.0 1) 。⑶心体比及左心室重量指数：DM 组较NC 组心体比及左 心室重量指数均增加(P0.0 1) 。2 、HE 染色：DM 组心肌细胞体积增