PPARγ介导糖基化终产物对神经干细胞增殖分化的作用.pdfVIP

q1艾摘篮 PPAR7介导糖基化终产物对 神经干细胞增殖分化的影响 东南大学医学院内科学专业 研究生：叶宽萍导师：孙子林王少华 摘 要 end rl的：糖艰化终产物(Advanced glycation proliferators—activated 实验通过PPA脚小发卡RNA(ShorthairpinRNA，shRNA)慢病毒载体的构建、黎囡沉 stem 化中的作用，为揭示糖尿病认知障碍的发病机制，防治其发，￡发展提供新的实验依据。 方法：1．分离孕14．5d Sprague 观察其增殖、分化的形态学变化及其特异性标志物的表达；2．设计针对PPA脚的靶向 序列，构建PPA脚基冈特异的shRNA慢病毒载体，将筛选到的重组质粒与包装质粒通 过脂质体共转染293T细胞，包装生产慢病毒颗粒并测定病毒滴度。慢病毒颗粒感染PCI2 (Western AGEs二f预 3d和7d，通过细胞计数和四甲基偶氮哗盐比色法(MTT法)法检测细胞增殖情况；以 AGEs干预3d，激光共聚焦成像结合免疫荧光双标法和Westernblot检测并比 200mg／L Associated 较各组细胞微管相关蛋白2(Microtubule 表达(MAP2／Nestin)，观察细胞分化情况； HocLSD法。 ANOVA分析，组间比较采用Post 结果：1．从孕14．5d的胎鼠海马组织中分离的细胞，形态学观察显示其具有自我增贿和 多向分化的潜能，且Nestin表达阳性，可确立为NSCs； 2．PPARy基因特异的shRNA 06TU／mL； 打：确插入到pLL3．7慢病毒载体中，成功包装生产慢病毒颗粒，病毒滴度为5×l 东南人。?硕I：学化论文 78．8％土6．0％，表明载体构建成功； 兜降球数餐无明娃差-片；AGEs组与CON组杵I比神经球数量明礁减少，差异仃统计学 5．激光兆聚 J}-4J统计学意义(尸0．05)，P队即旌凶沉默可逆转这一效应(尸0．05)； 尤明ji最差片： 6．Western 差异；AGEs组、AGEs+S组MAP2／Nestin比值小‘’rCON组，差异有统计学意义(P0．05)， 但AGEs组和AGEs+S组I、HJ无明鼹差异；。 使其PPA脚基因部分缺失表达；AGEs可抑制NSCs的增殖及其向神经元方向分化； 娥的抑制作用，而AGEs抑制NSCs向神经元方向分化的过程似与PPAR7无关。 天键词：过氧化物酶体增殖激活受体丫；糖基化终产物；慢病毒载体；RIgA干扰；神经 十细胞；海马霞塑；糖尿病认知功能障碍 lI REGULATIoNoF ADVANCEDGLYCATIoN END PRoDUCTSoNNEURALM STECELLS MEDlATEDBYPEROXISoME