rhBMP7对原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖的作用.pdfVIP

1 目 录 中文摘要3 英文摘要5 英文缩略词表7 引 言8 第 一 部 分 原发性开角型青光眼小梁网细胞的体外培养及鉴定 10 1.材料 10 2.方法 12 3 ．结 果 14 4 ．讨 论 16 第 二 部 分 rhBMP7 与原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖的关系20 1. 材料20 2. 方法21 3 ．结 果25 4 ．讨 论28 全 文 结 论31 参 考 文 献33 致 谢35 综述36 *本研究系福建省创新课题（2012-cx-26 ）资助 2 rhBMP7 对原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖的影响 中文摘要 目的 建立原发性开角型青光眼 （Primary open angle glaucoma ,POAG ）小梁网细 胞体外原代培养体系；分析不同终浓度重组人骨形态发生蛋白7 （Recombination human bone morphogenetic protein，rhBMP7 ）对POAG 小梁网细胞增殖的影响； 探讨rhBMP7 与POAG 发生、进展的相关性。 方法 取临床确诊为 POAG 的患者，行小梁切除术 （术中未使用丝裂霉素），切 除的含小梁网组织的深层巩膜组织块，运用组织块培养法，进行体外 POAG 小 梁网细胞原代及传代培养，将传 3 代POAG 小梁网细胞，通过倒置显微镜、免 疫细胞化学等方法观察体外培养细胞形态、生长特性及生物学特征等，鉴定体外 培养细胞类型；将终浓度为 0ng/ml （对照组）、20ng/ml 、50ng/ml 、80ng/ml、 100ng/ml、200ng/ml 的rhBMP7 无血清培养基，处理传3 代POAG 小梁网细胞及 经CFDA SE 标记的传3 代POAG 小梁网细胞，采用CCK8 法、荧光显微镜、流 式细胞仪等方法，检测不同终浓度rhBMP7 的无血清培养基对 POAG 小梁网细 胞增殖的影响。 结果 1.组织块贴壁约10 天左右，可见细胞从其边缘爬出，呈圆形、梭形、多角 形等，通过细胞传代培养、倒置显微镜观察、免疫细胞化学抗原表达检测，证实 体外培养细胞为POAG 小梁网细胞； 2.运用CCK8 法检测发现：经终浓度为0ng/ml（对照组）、20ng/ml 、50ng/ml、 80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml 的rhBMP7 无血清培养基处理后，POAG 小梁网 细胞吸光度(OD 值)分别为：0.5612±0.0269 、0.7242±0.0393 、1.4160±0.0162、 1.7404±0.0392、1.8538±0.0145、1.9364±0.0546；实验组细胞增殖率分别为1.37%、 2.96% 、3.70%、3.96% 、4.15% ；实验组与对照组之间及各实验组之间增殖差异 具有统计学意义P ＜0.05； 3.荧光显微镜观察示：经 CFDA SE 标记的 POAG 小梁网细胞，随着 rhBMP7 终浓度的增加，细胞量及密度增加，且荧光染色逐渐减弱； 4.采用流式细胞仪检测经0ng/ml （对照组）、20ng/ml 、50ng/ml、80ng/ml、 100ng/ml、200ng/ml 终浓度rhBMP7 无血清培养基干预的POAG 小梁网细胞， 与0ng/ml （对照组）相比，各处理组分裂、增殖细胞所占比例分别为:17.85%、 18.63%、20.10% 、27.45% 、72.41% ；随着rhBMP7 终浓度增加，荧光强度逐渐 3 减弱。 结论 rhBMP7 在一定程度上，可促进POAG 患者小梁网细胞的增殖，且在一定 范围内呈剂量-时间依赖性。 关键词