TGF-β对白血病细胞株Gli1、Gli2表达的作用.pdfVIP

·中文论著摘要· 1．2 l-1、G TGF-13对白血病细胞株G 表达的影响 目的 Hedgehog(HH)信号转导通路广泛存在于胚胎发育不同组织及时期，是胚胎 发育过程中的主要调节信号通路之一，在组织的损伤与修复中发挥着开启正常干 细胞自我更新的功能。但唧信号转导通路过度激活却可诱使正常干细胞转化成癌 干细胞，最终导致癌的发生。众多研究表明该通路与包括白血病在内的多种肿瘤 性疾病相关，因此抑制该通路有可能成为肿瘤预防和治疗的新靶点。 Gli作为转录因子，是腿信号转导通路的最后一个环节，其下游基因包括多 种与细胞增生分化相关的基因，可能是该通路导致肿瘤的关键因素。这些基因包 括调节细胞增生和分化的基因，维持细胞生长的基因，促进细胞自我更新的基因， 血管生成相关基因，上皮基质转化基因和侵袭基因。这些均提示该通路的活化可 能不仅和肿瘤的发生相关，还与肿瘤的复发，转移相关。Gti分子本身与肿瘤细 胞的发生发展并没有直接关系，但直接调控肿瘤细胞增殖、分化和转移的分子基 因转录水平则受到HH信号通路调控。 最近的研究倾向于其他途径对Gli的非经典激活，发现在有的肿瘤中存在由 TG卜13信号通路介导的Gli的非经典激活。TGF—B作为细胞因子，对白血病细 胞可以有一系列的影响，包括抑制细胞增殖和诱导分化、改变粘附分子和细胞因 子受体表达，以及诱导细胞凋亡等。TGF—Bl在TGF§家系中发现最早，且生物 活性最强，在造血调控方面起重要作用。 那么，在白血病中是否同样存在TGF一8信号通路对G1i的调控作用呢?本研 的mRNA和蛋白表达的影响，从而证明在白血病HL-60和U937细胞株中同样存在 TGF-8信号通路对Gli的调控作用，为白血病发病机制的完善提供新的思路，为 白血病的治疗提供新的靶点。 ．．L’—L 乃~云 TGF一13 1分别作用于HL一60 (1)0．Olng／m1、0．1ng／ml、lng／ml和lOng／ml (2)5ng／mlTGF_Bl作用于HL一60细胞和U937细胞72h后，流式细胞仪检测细 胞凋亡情况。(3)用0．1ng／ml、lng／ml、lOng／mlTGF-B1分别作用于肌一60细 胞和U937细胞，时间分别为6h、12h、24h。处理结束后收集细胞，提取mRNA， M i+5|I 检测Glil和Gli2的表达。(4)5ng／mlTGF—pl、5ng／mlTGF一9SIS3分 uM 因。(6)5 处理结束后收集细胞，提取mRNA和蛋白，检测Glil和Gli2的表达。(7)对照 组细胞在不含任何处理因素的1640培养液中培养。(8)ELISA法分别检测正常 人血清、HL_60细胞和U937细胞培养上清TGF-61水平． Gli2表达的影响 TGF—B 1分 细胞的增殖情况。(2)5ng／mITNF-Q+5ng／mlTGF一91作用于H卜60细胞和U937 细胞72h，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 R R 和U937细胞24h。处理结束后收集细胞，提取蛋白，检测TGF—BI和TGF—B II蛋白表达。