TGF-β1对病理性瘢痕成纤维细胞中β-catenin表达的影响和意义.pdfVIP

·中文结构式摘要· i TGF-B，对病理性瘢痕成纤维细胞中13-catenn表达的 影响及意义 实验目的 病理性瘢痕在临床上分为增生性瘢痕和瘢痕疙瘩两种类型，是机体对创伤产 生的异常组织反应。其临床表现为突出皮肤表面或呈持续生长状态，瘢痕形状不 规则，高低不平，质地坚韧，影响美观，部分患者还会产生疼痛和瘙痒感，甚至造成 瘢痕挛缩导致关节畸形、功能障碍，可严重危害人们的身心健康。因此，对病理 性瘢痕的预防及治疗成为临床上亟待解决的课题。长期以来，对其发病机制的研 究一直是国内外许多学者关注的重点，但其机制复杂，不能由任何单一因素来完 整解释。近年来，研究不再局限于单一物质的作用，而是将相关物质联系起来进 行整体研究。我们通过研究不同浓度的1’GF．PI对旷环连蛋白(阳tI即in)在病理性 瘢痕成纤维细胞中的表达情况变化，探讨TGF．Ⅳs=aa信号转导通路和 Wnt／l盼catenin信号转导通路在病理性瘢痕形成中的作用机制及相互关系，为临床 预防和治疗瘢痕提供细胞生物学及分子生物学水平的理论依据。 实验方法 随机选取瘢痕疙瘩患者3例为K组，增生性瘢痕患者3例为H组，同时随机选取 其他整形美容手术患者切除的正常皮肤组织3例，作为对照N组。将取下的皮肤标 本在超净工作台上剔成真皮组织小块，并转移到培养皿中，使其贴附于底面，再 1041ml 加入培养液，放入370C、5％CCl2温箱培养，每3天左右更换培养液。按2x 的细胞密度将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，分别以不同浓度的TGF．DI处理 细胞，将爬片取出；经固定，水化，0．5％TritonX．100孵育，阻断内源性过氧化物 滴加生物素化二抗，再滴加ABC复合物，二者均在370C下孵育30min，各步骤之间 均用缓冲液洗3次。DAB显色后加入苏木素复染，树胶封片。阴性对照省略第一抗 体，用PBS缓冲液代替。显微镜下观察并随机计数5个高倍镜视野(x200)阳性细 胞数．采用SPSS13．0软件进行统计学分析，组间比较采用单因素方差分析和g检 改变幅度的比较采用成组资料两样本均数t检验，P0．05为有显著性差异。 实验结果 i 一、B-oatenn在成纤维细胞中的表达和定位 1．争catenin主要表达于成纤维细胞胞浆内．为棕褐色颗粒样物质，呈弥漫性 分布，在细胞核内也有发现。 2．相同TGF-BI处理组的即蛐在K组与H组成纤维细胞中的表达水平大 于N组的成纤维细胞俨0．01)，在K组与H组成纤维细胞中相比较其差别无统计 学意义(p田．05)． i 二、B--caten n在成纤维细胞中的动态表达 i3-catenin在各组中的表达水平随TGF．pl浓度变化呈先递增后递减趋势，三者 计学意义护加．05)，而在N组成纤维细胞与K组及H组成纤维细胞之间明显 (氏0．01)． 实验结论 l、[gcatenin的过度表达是病理性瘢痕等纤维化疾病的重要机制之一，即 Wnt／脚．atenin信号转导通路对病理性瘢痕的形成起到重要作用。 2、病理性瘢痕成纤维细胞中TGF．[31的负反馈调节作用被破坏，导致正反馈 环路持续放大也是病理性瘢痕等纤维化疾病的重要机制之一，即TGF．13l的负反馈 调节作用对病理性瘢痕的形成起到重要作用。 中存在联合作用：TGF．13,对成纤维细胞的作用，激发了Wnt信号系统，导致细胞 浆内游离B．catenin水平增高，引起真皮成纤维细胞的增殖表达和分泌，最终导致 2 胶原持续性过度沉积，形成病理性瘢痕。 关键词 B-连环蛋白；病理性瘢痕；成纤维细胞；动态表达 ·英文结构式摘要· The