早产儿脑损伤动物模型制作的研究现状-第三军医大学学报.docVIP

早产儿脑损伤的动物模型 赵聪敏1，鲁利群2 (1第三军医大学新桥医院儿科，重庆 400037；2成都医学院第一附属医院儿科，成都 610500 ) 近年来，产科和新生儿重症监护技术不断提高早产儿存活率增加，脑损伤发病率亦呈逐年增加趋势。根据神经病理学可分为①脑白质损伤(white matter injuryWMI)，包括脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia，PVL )和弥散性脑白质损伤；②非脑实质区出血，包括脑室周围脑室内出血、蛛网膜下腔出血及脉络丛出血等；③其他部位损伤，如脑实质、小脑、脑干等。cular hemorrhage, IVH）是10年前早产儿WMI则是目前最常见的脑损伤类型，发生于胎龄23～32周的早产儿，是造成严重神经系统后遗症的主要原因。选择一种最符合人类发育过程的动物模型非常困难，不同物种脑结构和发育阶段存在差异，脑的不同区域发育速率。迄今尚无一种最理想的能模拟人动物模型。主任医师教授任中华医学会重庆市儿科专委会委员中华医学会重庆市儿保专委会委员。承担科研课题2项。发育期脑损伤的早期识别与干预、小儿脑瘫的评估与康复、儿童心理行为障碍的诊断与特别化训练，小儿癫痫的诊断与治疗参编专著3部。发表统计源期刊论著30余篇。～Back等[2]通过免疫组化定位检测少突胶质细胞特异性抗体，以判断孕龄90～～～采用小动物所建立的模型在观察长期的神经病理情况及行为学方面优势～hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）模型得到较多研究发展，以鼠为代表的嗜齿类动物因为繁殖快、价格低廉被大量应用于实验研究。生后1 d（postnatal day 1, P1）、生后2 d（postnatal day 2, P2）、生后3 d（postnatal day 3, P3）、生后5 d（postnatal day 5, P5 )的新生大鼠约分别相当于孕龄18～2020～2424～2828～32[3]。生后7 d（postnatal day 7, P7）新生大鼠一直是足月儿的动物模型，但近来研究显示其相当于接近足月（32～36Zhu等对C57/BL6 雄性小鼠的研究也发现，生后5 d和9 d的小鼠近似于人类早产儿和足月儿[5]。另外，对生后3、7、10、21 d大鼠的脑片研究显示，P3和P7是脑室周围白质发育受损的高峰时期[6]。 采用大动物建立的模型所提供的生理参数更接近于人类宫内或出生前的情况[7]。胎猴曾用建立HIBD动物模型，1960年LevineHIBD动物模型，1981年Rice结扎P7新生鼠单侧颈总动脉后置于缺氧舱中制得HIBD模型。该HIBD的研究集中到脑损伤～～Alfreda[9]予 P3 新生大鼠吸入5％60 min，24 h后发现30只动物模型中14只死亡，存活者9只出现脑损伤，损伤程度与存活的脑损伤早产儿一致。研究者还发现未成熟大脑对损伤刺激比成熟大脑更为耐受，如将 P3大鼠暴露于与P7同样的缺氧环境中，脑损伤程度轻于后者。Tai等[10]首次研究了P3大鼠HIBD后生长、代谢及行为学的改变。模型组大鼠予结扎右侧颈总动脉后暴露于8%的氧1.5 h，对照组假手术并暴露于室内空气中1.5 h。通过摄食行为评估、间接热量测定和开放地带试验检测至生后33 d，结果发现HIBD大鼠出现显著的生长障碍，转圈和旋后行为增加，摄食行为的改变是由生长障碍所致。Uehara等通过结扎P5新生鼠双侧颈总动脉建立PVL模型，研究低灌注引起的脑白质损伤。Go?i-de-Cerio等[12]将未成熟胎羊单侧颈总动脉结扎1、3 h后处死胎羊发现，神经元坏死主要见于中脑、脑桥、深部小脑核以及基底核，凋亡细胞则广泛见于白质和灰质，不固定于某一脑区。部分胎羊表现为广泛的细胞膜不对称性改变，以及线粒体完整性受损。此模型证实缺氧缺血后早期的细胞死亡形式如凋亡和坏死具有脑区特异性和显著的动力学特征，说明治疗策略中拯救细胞尤其是凋亡细胞非常重要。 上述模型的缺点在于不能由于胎盘功能不全脐带因素或母体原因造成的胎儿宫内缺氧病生复杂多样。钳夹孕鼠双侧子宫动脉的方法建立宫内模型～夹孕鼠子宫动脉恢复血供剖宫取胎，胎鼠脑重明显低于对照组，脑组织神经元变性水肿，胶质结节形成，脑组织液化坏死。Mallard等在猪怀孕30 d(足月为68 d) 时结扎其一侧子宫动脉，建立猪的 HIBD模型。该方法导致胎猪脑室增大，皮质、纹状体和海马体积缩小，神经元数目减少，树突和轴突生长受。夹闭脐带10 min可接近足月胎羊短暂窒息，组织学上可见海马区神经元坏死脑电图显示神经元活动受抑。Derrick67～70%Derrick等[17]又制作了相同可重复的孕兔HIBD宫内模型，以模拟胎盘早剥分娩损伤。70%～79%Ure