抑制Ecoli的SOS应答对恩诺沙星抗药性的影响.PDF

中国科学: 生命科学 2015 年 第45 卷 第5 期: 498 ~ 506 《中国科学 》杂志社 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 抑制E. coli 的SOS 应答对恩诺沙星抗药性的影响 ①② ①② ①② ①② ①② ①② ①② 王进文 , 胡明 , 白华 , 颜世敢 , 李璐璐 , 骆延波 , 齐静 , 韩哲③, 刘玉庆①②* ① 山东大学农学院, 济南 250101; ② 山东省农业科学院畜牧兽医研究所, 济南 250101; ③ 山东省科学院新材料研究所, 济南 250014 * 联系人, E-mail: liuiuqing@126.com 收稿日期: 2014-11-11; 接受日期: 2014-12-31 国家自然科学基金(批准号: 、山东省科技攻关计划(批准号: 2012GGC02012) 、山东省自然科学基金青年基金(批准号: ZR2013CQ037) 、国家科技重大专项(批准号: 2013Z003)和山东省农业重大应用技术创新课题资助 doi: 10.1360/N052014-00280 摘要 通过敲除SOS 应答启动蛋白基因recA, 探讨SOS 应答对E. coli 恩诺沙星抗药性的 关键词 影响, 并体外评价RecA 抑制剂和恩诺沙星联用对细菌协同抑制作用的影响. 利用Red 重组系 E. coli SOS 应答 统, 构建E. coli ATCC 25922 的recA 缺失菌株E. coli ATCC 25922/∆recA; 在恩诺沙星压力下, recA 利用荧光定量PCR 测定SOS 应答系统相关基因recA 和umuC 表达量的变化. 用微量肉汤稀 恩诺沙星 释法测定恩诺沙星等常用抗生素对两个菌株的MIC 变化; 利用梯度平板法测定恩诺沙星对两 抗药性 个菌株抗药性变异的影响; 合成RecA 抑制剂, 并评估其与恩诺沙星联合抑制E. coli 生长及其 RecA 抑制剂 抗药性的作用. 结果表明, E. coli ATCC 25922/∆recA 菌株对恩诺沙星的最低抑菌浓度值降低 至原始菌株的 1/8; 经药物处理后, 在梯度平板上, recA 缺失菌株较野生型不易产生抗药性; 荧光定量PCR 表明, recA 缺失菌株或在RecA 抑制剂作用下, SOS 应答系统受到一定的抑制. 敲除recA, 使菌株对恩诺沙星的抗药性和抗药率均明显降低; RecA 抑制剂在一定程度上能抑 制SOS 应答, 起到协同抑菌作用. 长期的生物进化, 使细菌形成较为稳定的物种 药性调控机制研究, 无论是理论上还是医疗应用上 的多样性和对其生存环境适应机制的多样性, 但是, 都有迫切需要. 剧烈的环境变化, 如接触高剂量的抗生素, 则会诱导 在细菌的各种调控系统中, 细菌的 SOS 应答系 细菌的各种生理调控机制、突变机制, 甚至促使细菌 统从整体上对细菌许多重要细胞功能具有调控作用, 间通过质粒传递抗药性基因, 形成对该种抗生素的 包括修复单链 DNA(ssDNA)损伤及促进其突变和优 高度适应[1,2]. 目前, 大部分抗药性研究集中于终端 选、对被调控基因的表达量调节、调控细胞分裂、促 菌株样