关节软骨损伤生物标志物的蛋白质组学初步探究.pdfVIP

㈣㈣嗍㈣洲0㈣矾 Y。1901080 目 录 中文摘要……………………………………………………………………．．1 英文摘要……………………………………………………………………．．4 研究论文 关节软骨损伤生物标志物的蛋白质组学初步研究 引言……………………………………………………………………．．7 第一部分关节软骨损伤模型构建及其生物学的特点 前言……………………………………………………………………．．9fjIJ舌……………………………………………………………………．． 材料与方法…………………………．．j………………………………．．10 结果……………………………………………………………………．．14 附图……………………………………………………………………．．18 附表……………………………………………………………………．．24 讨论……………………………………………………………………．．25 小结……………………………………………………………………．．28 参考文献………………………………………………………………．．29 第二部分 应用SELDI．TOF．MS技术检测关节软骨损伤生物标志物 血清、关节液蛋白表达谱 前言……………………………………………………………………．．32日IJ舌……………………………………………………………………．．32 材料与方法……………………………………………………………．．35 结果……………………………………………………………………．．38 附图……………………………………………………………………．．39 附表……………………………………………………………………．．43 讨论……………………………………………………………………．．45 小结……………………………………………………………………．．48 参考文献………………………………………………………………．．49 结论……………………………………………………………………．．51 综述膝关节软骨损伤的研究现状及进展………………………………．．52 致谢…………………………………………………………………………．．60 个人简历……………………………………………………………………．．61 中文摘要 关节软骨损伤生物标志物的蛋白质组学初步研究 摘 要 目的：改良的Hulth造模方式建立关节软骨损伤模型，观察软骨损伤 的大体和微观状态下特点，采用蛋白质组学质谱：表面增强激光解吸离子 液生物标志物。 方法：选取新西兰大白兔20只为软骨损伤模型组。软骨损伤模型组： 无菌条件下，沿兔膝关节内侧行纵型切口，长约4cm，暴露膝关节，切断 前后交叉韧带及内侧副韧带，完整切除内外侧半月板，保留关节软骨面。 术后自由活动，不固定伤肢。30min／d分2次驱赶，连续lO周。以不做任何 体外观及电镜、光镜观察关节软骨的病理特点，并以X线检查关节软骨损 伤情况。同时软骨损伤模型组和正常对照组兔处死，抽取血清、关节液， 4℃室温条件下静置1h，然后4。C室温条件下离一t二,10min，速度：血清调整 为3000r／min，关节液1000 交换芯片(CMl0)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析关节 软骨损伤后血清、关节液中蛋白质谱的改变，寻找到关节软骨损伤的生物 标志物。 结果： 1关节软骨损伤模型的建立及各期生物学的特点：(1)正常对照组，大体 组织学观察，关节面光滑平整，光泽明亮，无裂纹及软化灶；关节边缘齐 整规则，无骨赘形成；HE图片显示成熟软骨细胞核小而圆，可见1~2个核 仁，胞质弱嗜碱性，大小分布均匀，软骨周边部分为幼稚软骨细胞，较小， 呈扁圆形，常呈单个分布。越靠近软骨中央，细胞越成熟，体积逐渐增大， 变成圆形或椭圆形；电镜超微结构，软骨细胞和细胞核为椭圆形或近圆形 的盘状结构，细胞