单眼形觉剥夺大鼠视皮层NMDA-CREB级联反应的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 单眼形觉剥夺大鼠视皮层NMDA．CREB 级联反应的研究 目的 人和哺乳动物出生后，视觉系统能够根据视觉环境的刺激调整和改变与生俱 有的神经联系和突触结构。这一改变发生的最敏感时期称为视觉发育可塑性关键 期。在这个关键期内，由于各种原因导致眼部接受的有效光线刺激减少，使得矫 正视力低于正常形成弱视。其中，在视觉关键期内，由于屈光间质混浊(角膜白 斑或白内障)，完全性上睑下垂，造成单眼形觉剥夺更容易形成弱视。形觉剥夺 性弱视一般为单眼性弱视。引起形觉剥夺性弱视的原因，既有单眼形觉剥夺因素， 也有双眼异常相互作用因素。弱视的发病机理，一直是眼科学者们多年来研究和 讨论的热点话题。 目前已有的研究发现，谷氨酸及其受体在弱视的发病机制中扮演着重要的角 色，尤其是NMDARl起着重要作用。NMDARl是谷氨酸受体的一种主要亚型，为 特异性离子通道，与配体结合后可以使神经细胞膜对Ca2+的通透性增加，ca2+大 量进入细胞内，作为第二信使激活Ca2+依赖酶，引起细胞内生理效应的变化。 NMDARl与长时程增强和长时程抑制、学习、记忆、突触可塑性有关。NMDARI 在视皮质发育过程中可塑性的调控、成年后视皮层神经元突触联系的可塑性的调 节、诱导c．fos基因的表达、以及与蛋白激酶C的相互作用中都起重要作用。 CREB在单眼视觉剥夺时可被激活，其对视觉优势柱的可塑性变化具有重要 作用。有研究表明对于弱视动物模型进行HSV．mCREB治疗，其视觉优势可塑性 可以恢复。在神经科领域里，NMDA．CREB级联反应的激活，可以保护小脑颗粒 细胞。鉴于NMDA和CREB均与弱视的发病机制有关，我们拟研究这一级联反应 在弱视发病机制中的作用，在弱视的发病机制中CREB是以其磷酸化的形式 pCREB在发挥作用，所以我们研究所选取的检测指标为pCREB。 左旋多巴是多巴胺的一种前体，它在通过血．脑屏障后转化为多巴胺发挥作 用。多巴胺参与了敏感期视皮质的发育，多巴胺及儿茶酚胺代谢可以解除弱视眼 的皮质抑制，从而改善视功能。目前，左旋多巴已经广泛应用于临床治疗弱视并 取得了初步成效。对其治疗弱视的分子机制进行探讨，有助于阐明弱视的发生机 制。 我们首先制作单眼形觉剥夺动物模型，对形觉剥夺模型动物的电生理功能进 行检测并对其视皮质神经元的超微结构进行观察；接下来，我们对单眼形觉剥夺 大鼠视皮质NMDARl、pCREB分子表达水平进行检测，并观察左旋多巴对 NMDARl、pCREB表达的影响；第三部分，我们对正常动物及模型动物双侧视皮 质中NMDARl及pCREB的表达进行分子生物学检测，并使用抑制剂进行干预， 探讨NMDA-CREB级联反应在单眼形觉剥夺弱视优势眼形成中的作用。 方 法 1、制作单眼形觉剥夺动物模型，14日龄SD大鼠幼鼠分为正常组与实验组， 实验组腹腔注射麻醉后，封闭实验眼，使上下睑黏连形成单眼剥夺。对照组大鼠 不做任何处理。两组组大鼠分别在同等自然光照环境下饲养至45日龄。 2、形觉剥夺动物模型的电生理研究，对两组大鼠分别进行F．VEP检查，测 量Pl波峰潜时和振幅，并进行比较。 3、电镜观察视皮质神经元的超微结构，取实验组及对照组大鼠封闭眼对侧的 视皮质，使用透射电镜，观察其超微结构。 4、使用免疫组织化学，实时荧光定量PCR，蛋白免疫印记技术对45日龄的 白表达进行检测；自46日龄起，分别给予单眼形觉剥夺大鼠左旋多巴40mg／kg(LD 组)和等体积生理盐水(NS组)灌胃，每日1次，连续28天，对LD组、NS组 鼠视皮质中NMDARl、pCREB的表达进行检测，方法同前。 5、制作单眼形觉剥夺动物模型，使用免疫组织化学、蛋白免疫印记的方法检 测正常组及MD组大鼠双侧视皮质中NMDARl，pCREB的表达，分别使用钙调 组及Ns组大鼠双侧视皮质NMDARl，pCREB的表达，方法同前。 2 馇 单 当日7卜 1、形觉剥夺动物模型的电生理研究，正常大鼠F．VEP呈现典型的NPN波形， Pl波峰潜时短，波峰陡直。形觉剥夺大鼠F．