大鼠体内苯并(α)芘的生物标志物探究.pdfVIP

大鼠体内苯并(0【)芘的生物标志物研究 硕士生姓名：刘海日 指导教师：李发胜教授 专业名称：临床检验诊断学 摘要 目的：建立大鼠血液中苯并(c【)芘的三种代谢产物：l-羟基苯并(a)芘 (BPDE．DNA)的高效液相．荧光检测方法，并研究这三种代谢产物在血液中的浓 度随着染毒剂量改变的变化规律。通过对比灵敏性、可检测性、稳定性、操作的 简便性等指标来衡量其代谢产物作为苯并芘生物标志物的可行程度。 方法：取纯度为96％的苯并(cL)芘溶于玉米油中，配置成高剂量(5～15) 三个组为暴露组，每组90只，D组10只，为非暴露空白对照组。处理前6h禁食、 禁水。A组为高剂量组，90只大鼠随机分为lO个小组，用高剂量灌胃液灌胃2mL， mg／kg、8mg／kg、9mg／kg、10mg]kg、11mg／kg、 染毒剂量分别为5mg／kg、6mg／kg、7 12 mg／kg：B组为中剂量灌胃组，灌胃溶液为中 mg,瓜g、13mg／kg、14mg／kg、15 浓度灌胃液2mL，染毒剂量分别为0．2 mg／kg、0．4mg／kg、0．6mg／kg、0．8mg／kg、 1．0 mg／kg、1,4mg／kg、1．6mg／kg、1．8mg／kg、2．0mg／kg：C组为低剂 mg／kg、1．2 量染毒组，灌胃液为低浓度灌胃液2mL，染毒剂量分别为O．02mg／kg、0．04mg／kg、 0．06 mg／kg、0．12m班卧O．14mgg、0．16mgg、O．18 mg／kg、O．08mg／kg、0．10 m眺g；D组为空白对照组，灌胃2mL的空白玉米油。每6h处理一 mg／kg、0．20 次，一共处理三次。处理期间大鼠禁食禁水。最后一次处理完毕后，2h眼眶取血， ．20℃保存。 血样分为两个部分，一部分离心取血浆，另一部分留取全血，用以提取全血 DNA。 取样本血浆lmL，加丙酮2mL，涡旋5rain，离心10rain，取上层有机相， 置于减压旋转蒸发仪中，氮气吹干。然后加入1509L丙酮，509L荧光衍生剂碘 记录色谱图。 取样本全血lmL，用全血DNA提取试剂盒处理，提纯的血浆总DNA在 O．1nmol／L HCI、90℃恒温水浴箱中水解4 h，乙酸乙酯提取酸水解产物一 四醇．苯并(a)芘，提取后的乙酸乙酯溶液在减压蒸发仪中用氮气吹干，复溶于 2009L丙酮中，取201tL进样，记录色谱图。 染毒组中三种代谢产物的血液浓度，用血液浓度相对染毒浓度做图，探讨其相关 关系。 结果：本实验方法能够精密、有效地检测三种代谢产物，样品提取回收率良 好，精密度较高、稳定性良好。 关系。BPDE．DNA复合物在低剂量组中没有有效检测，在中、高剂量组中达到有 效检测，在中剂量组中于染毒剂量呈现明显正相关关系，在高剂量组中由于超过 酶饱和浓度，没有发现明显的正相关关系。 合物的浓度，具有良好的检测性，并且3-OHBaP相对染毒剂量的灵敏性也高于 1．OHBaP和BPDE．D_NA。 结论：本文建立了稳定、高效的高效液相色谱．荧光检测方法，用于苯并(a) 检测性等指标均为3-OHBaP最为优良，可以广泛的进行实际应用。 关键词：苯并(a)芘高效液相色谱法代谢产物生物标志物 2 onbiomarkerof inrats Study benzopyrene Master candidate：HairiLiu degree