大鼠卵巢组织玻璃化冷冻和自体移植的实验研究.pdfVIP

中文摘要 大鼠卵巢组织玻璃化冷冻及自体移植的实验研究 摘 要 随着肿瘤综合治疗的进步，年轻女性肿瘤患者的生存率得到了很大提 高。但在治疗癌症的同时，也带来了许多副作用，如卵巢早衰、正常卵巢 的切除，丧失内分泌及生育能力等等。由于部分患者处于生育年龄，如何 保存生育能力成为亟待解决的问题。 目前有三种方法来保存患者的生育能力：即胚胎冷冻，卵母细胞冷冻 及卵巢组织冷冻。胚胎冷冻的只适用于已婚女性，而卵母细胞冷冻可用于 单身女性，但妊娠率很低。而且这两种技术操作过程复杂，且需长时间促 排卵及取卵，另外使用促排卵药物会使血清雌激素水平升高，禁用与一些 雌激素敏感性恶性肿瘤患者。而卵巢组织冷冻是未成年人及未婚女性的唯 一选择，因为这一方法不需要配偶，亦不需要促排卵药物，可以在任何周 期取材，尤其适合需要及时治疗的肿瘤患者。 卵巢组织冷冻保存有三种方式：慢速程序化冷冻、常规玻璃化冷冻 (conventional cover 其操作过程复杂，需要程序冷冻仪，费用高。而常规玻璃化冷冻较之更为 简单、经济，冷冻效率更高，因而更为普遍。中国台北Chen等报道的直 接覆盖玻璃化冷冻法，将小鼠卵巢组织与液氮直接接触，进行冷冻保存， 该法降温速率可达15000。C／min，冷冻效果优于其他常规的玻璃化冷冻方 法。但该方法目前研究尚少，也没有展开应用。 冷冻保存卵巢组织的目的为将卵巢组织移植回体内·，～定程度上恢复 冻融卵巢组织的内分泌及生育功能。然而在移植过程中，新生毛细血管形 成前，会造成缺血再灌注损伤从而丢失大量卵泡。基于这些，有人提出不 同的策略以优化移植结局，如移植较小的组织块，或在移植前使用FSH、 维生素E和VEGF来预处理动物等，来提高移植物的生存率。 尽管卵巢组织的冷冻及移植已取得了一定的进展，关于移植冻融卵巢 组织目前国内报道尚少见，也存在很多问题亟待解决：①寻求最佳冷冻方 案以减少冷冻及复苏造成的损伤；②如何优化移植方案，减少缺血．再灌 中文摘要 注损伤，为移植的卵巢组织的生长提供良好条件；⑧探讨接受移植物功能 恢复的时间及维持的时间；④探讨卵巢癌患者自体移植卵巢组织的安全 性；⑤移植的卵巢组织中卵子的发育及受精能力的探讨：⑥接受卵巢组织 移植的患者的社会心理因素以及对生活质量的影响，等等。若这些问题能 够一一解决，冷冻移植卵巢组织技术将能够广泛应用于保存肿瘤患者的生 殖及内分泌功能，以提高女性患者的生活质量。 本研究以雌性性成熟Wistar大鼠作为研究对象，比较常规玻璃化冷 冻方法及直接覆盖玻璃化冷冻方法对卵巢组织的影响，同时观察FSH和 VEGF在移植冻融卵巢组织过程中的作用，以期为优化人类卵巢组织冷冻 和移植提供实验依据。 第一部分大鼠卵巢组织两种玻璃化冷冻保存方案的比较研究 目的：本研究比较直接覆盖玻璃化冷冻方法及常规玻璃化冷冻方法对 大鼠卵巢组织的冷冻保存效果。 鲜对照组，B组一常规玻璃化冷冻组(conventional cover 直接覆盖玻璃化冷冻组(direct 卵巢切除。B组，C组分别使用CV和DCV的方法冷冻保存。卵巢组织经HE 染色后，于光镜下观察新鲜及冷冻复苏后原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡 的形态，并计算每个切片中形态正常的各级卵泡的百分比，各级形态正常 卵泡的百分比=(各级形态正常的卵泡个数／各级卵泡总个数)×100％。为避 免重复计数，卵泡计数以卵母细胞核为标记。并用TUNEL法检测各组卵 巢组织中卵泡的凋亡率，卵母细胞核呈阳性或超过50％的颗粒细胞为阳性 即判断该卵泡凋亡。每个切片随机抽取10个视野，计数卵泡数(包括各级 卵泡)。TI腿L阳性率=(卵泡凋亡个数／卵泡总个数)×100％。 结果： 1士4．57％和62． 3．06％和73．17+4．53％；次级卵泡为：84．03+4．07％，25．3 2 中文摘要