大鼠局灶性脑缺血后继发性脑损伤机制和替米沙坦脑保护作用的研究.pdf

中文摘要 大鼠局灶性脑缺血后继发性脑损伤机制及 替米沙坦脑保护作用的研究 摘 要 脑血管病是造成中国居民死亡的第一原因和成年年人残疾的第一原 因，以缺血性脑血管病占80％。研究表明，脑缺血触发一系列复杂的病理 级联反应，包括能量代谢异常、炎症反应、氧化应激、自由基生成、兴奋 性氨基酸的毒性作用等，直接或者间接导致神经细胞凋亡／死亡，破坏血 脑屏障形成脑水肿，并最终导致神经功能缺失。在脑缺血后复杂的病理损 伤机制中，炎症反应是继发性脑损伤的最重要原因之一。尽管目前对缺血 性脑损伤机制有了比较深入的了解，但仍缺乏有效的治疗手段。除了极少 数脑缺血患者在超早期经过溶栓治疗取得满意效果外，绝大多数患者将面 临残疾甚至死亡的厄运。探讨有效阻止缺血性脑损伤机制，保护神经细胞 的方法，是目前神经科学研究的热点和难点。 尽管已经有多种药物经过实验研究，证明具有抗炎、抗氧化、抗凋亡 等作用，但多数未能在临床得到广泛应用，使理论和实践大大脱节。替米 1 沙坦是一种临床广泛应用的血管紧张素受体阻断剂类(angiotensintype receptor 沙坦不仅能够有效治疗高血压、保护靶器官和减轻心室重构，还能够对脑 缺血具有良好的抗炎作用，能够显著减轻脑梗死体积、脑水肿和继发性脑 损伤，其机制多与激活过氧化物酶体增殖物激活受体丫(peroxisome prolixferator_activated PPARY是一个关键性核转录因子，与其激动剂或者配体结合后活化，具 有抗炎、抗氧化、抗凋亡、神经保护等多重作用。替米沙坦是唯一一种具 有活化PPARy功能的ARB类药物。结合基础研究和临床应用的实际需要， 替米沙坦可能是治疗缺血性脑血管病的主要药物之一，但替米沙坦的作用 机制仍需深入研究。 应用线栓法建立大鼠永久性局灶脑缺血模型，分别对炎症反应代表性 为代表的血脑屏损伤程度等方面进行动态观察，并应用PPAR丫激动剂替 中文摘要 米沙坦和PPA脚特异性拈抗剂GW9662进行干预，观察上述各因子的变 化，以及评价神经功能缺失、脑水肿和梗死体积等。以PPARl,为切入点， 深入探讨脑缺血后脑损伤机制及替米沙坦的脑保护作用机制。 本研究将分三部分对上述内容进行探讨，各部分内容概述如下。 第一部分大鼠脑缺血后炎症反应及替米沙坦抗炎作用机制研究 的表达变化，探讨替米沙坦的抗炎作用机制。 方法：应用Longa等的线栓法建立MCAO大鼠模型，采用成年健康 雄性Sprague—Dawley大鼠，体重230g---250g。实验1：将大鼠随机分为 点分为3h、6h、24h、48h、72h5个亚组。实验2：将大鼠随机分为假 mg／kg于MCAO 手术前lh以灌胃方式给予，以防止大鼠麻醉时呕吐；假手术组和对照组 给予等体积的生理盐水；替米沙坦+GW9662组于MCAO手术前1h以 灌胃方式给予30 GW9662。 mg／kg替米沙坦，术后立即腹腔注射4mg／kg 将各组大鼠分别于相应时间点进行神经功能评分后断头处死，采用免疫组 化、western blot和qR—T MMP．9等mRNA和蛋白水平的动态变化，TTC染色评价脑梗死体积， 干湿重法评价患侧脑水肿。 结果：MCAO组大鼠脑缺血后自24h开始，出现明显的神经功能缺 失，持续并进行性加重至所观察到的72h，与正常组比较差异有统计学意 义(尸O．05)。同时，自脑缺血24h开始，PPA脚表达呈明显减少趋势， 而NF．v．B、Egr-1、MMP一9等呈明显增加趋势，且持续至本研究所观察到 的72h，与正常组比较，差异有统计学意义(尸O．05)。术后24h，替米 沙坦干预组与溶剂对照组比较，神经功能缺失有明显改善，脑水肿明显减 轻、梗死体积明显减小，保护性因子PPA脚等表达明显增加，而NF．KB、 GW9662组与替米沙坦组比较，神经功能缺失