大鼠弥漫性脑创伤中JNK介导的P53通路对神经元自噬的分子机制探究.pdf

中文摘要 大鼠弥漫性脑创伤中JNK介导的P53通路对神经元 自噬的分子机制研究 摘 要 脑创伤的发病率逐年升高，如何降低致死率和致残率就显得尤为重 要。TBI引起的一系列生化生理和病理方面反应可以导致神经元持续数天 到数周时间的细胞死亡和神经功能障碍。以前在TBI引发的神经功能障 碍与细胞坏死和凋亡方面研究较为深入。白噬作为神经细胞死亡的一种形 式，近期越来越受到关注，但是在TBI中的作用机制研究不足。目前国 内外研究焦点集中于创伤后的神经元白噬过程中信号转导通路和标志性 基因方面。 细胞内外的很多刺激可以诱导自噬的激活，其是一系列细胞分子事件 的级联反应的结果。近来研究发现MAPK家族的JNK基因在神经元自噬 发生后表达升高，同时其下游因子p53同时表达也升高，这是否与外伤导 致神经元自噬的激活有关，目前不得而知。文献报道在研究肺癌肿瘤细胞 的自噬之中发现，自噬基因DRAM是p53的靶基因，对于癌细胞的自噬 的解聚存在调节作用。说明肿瘤抑制因子p53在肺癌中可以调控自噬。我 表达升高。那么JNK通路是否能通过对p53的调节来激活神经元自噬， 在TBI中是这条通路是否成立这也是本研究的目的，本论文分三部分来 阐述。 第一部分大鼠弥漫性脑创伤后自噬相关蛋白的表达 脑创伤模型，检测大鼠弥漫性脑创伤后是否存在神经元自噬。． 方法：采用本实验室改良Marmarou方法。大鼠随机分成：①假手术 6 个时间点。检测@HE染色；②免疫组学法检测beclin．1的蛋白表达； 中文摘要 II／LC3 ③Western．blot法检测LC3I的比值和beclin．1的蛋白表。应用 6．0和Gel．Doe分析系统定量分析测定。实验中所得数据均 ImageProplus 用i±s表示，用SPSS11．5统计软件进行重复方差分析，以单侧P0．05， 表示差异有统计学意义。 结果： l光镜下观察大鼠脑创伤模型切片 1．1伤后大鼠脑组织大体观察伤后可见蛛网膜下腔出血，伴随少量脑 室出血；点状出血于脑实质多见，多低位脑干的背侧，脑表面的血管充血 明显，未见局部脑挫伤。 1．2HE染色观察组织形态学的改变Sham组脑组织结构正常，血管 管腔正常，管壁光滑，神经细胞数量多，形态完整；TBI组神经元胞体皱 缩呈三角形，胞浆嗜色性染色减弱，核仁皱缩浓染，细胞周围出现间隙， 出现神经元细胞变性坏死改变。 细胞的胞质，Sham组偶见阳性细胞，着色浅淡，免疫反应性不随时间发 生变化。TBI组与sham组比较，伤后6hbeclin．1阳性细胞显著增多，着 义俨O．05)。 II／ 3海马和皮层部位LC3的Westernblot检测结果Sham组LC3 LC3 I的比值和LC3I与LC3II的蛋白表达量在各时间点无变化；TBI组 LC3 II／LC3 II和LC3 I的比值随着时间点依次升高，TBI组与Sham组比 II／LC3I的比值显著升高(尸0．05)，伤后表达持 较，伤后6h开始LC3 续升高，高表达状态持续至伤后72h(尸0．05)。 4海马和皮层部位beclin．1的Western beclin．1 蛋白表达量在各时间点无变化；TBI组与Sham组比较，伤后6h 蛋白量显著增高。(尸O．05)，伤后48h达高峰，高表达状态持续至伤后 48h结果比较差异有统计学意义(尸0．05)。 5LC3和PI的共聚焦检测结果 在TBI组中神经元细胞胞浆中可见大量绿色和红色荧光聚集，此时 中文摘要 性细胞数量明显