根据细胞周期序贯联合免疫抑制剂对肾小球疾病影响的探究.pdfVIP

根据细胞周期序贯联合免疫抑制剂对肾小球疾病影响的研究 中文摘要 目的：1．建立阿霉素肾病大鼠模型，目的为建立临床表现和病理特点与人类肾小球疾病 相似的大鼠模型。2 ．将免疫抑制剂根据细胞周期序贯组合成不同的方案，应用于阿霉素 肾病大鼠模型，观察肾脏病理改变、24 小时尿蛋白定量、血生化指标的变化，以及对足细 胞相关因子、肾组织纤维化相关因子的影响，并探讨其作用机理，为临床上联合应用免疫 抑制剂治疗肾小球疾病提供新思路。3 ．比较环孢素A 与霉酚酸酯序贯及联合用药对阿霉 素肾病大鼠的影响。4 ．建立根据细胞周期序贯联合使用免疫抑制剂治疗肾小球疾病的临 床方案，进行病例收集，观察临床疗效。 方法：1．采用首次大剂量（6mg/kg ）冲击诱导，一周后小剂量（4mg/kg ）给药的方法建 立FSGS 肾病大鼠模型；以丽春红S 法检测24h 尿蛋白定量；全自动生化仪检测血清总蛋 白（TP ）、白蛋白 （ALB ）、胆固醇 （Chol ）、甘油三酯 （TG ）、尿素氮 （BUN ）、血 肌酐 （Scr）的变化；光镜、电镜观察肾脏病理变化；双抗体夹心ELISA 方法检测血清基 质金属蛋白酶2 （MMP-2 ）、基质金属蛋白酶9 （MMP-9 ）、转化生长因子-β （TGF-β ）； 1 1 免疫组化方法检测纤维连接蛋白（FN ）、层粘连蛋白（LN ）和结缔组织生长因子（CTGF ） 的表达。2 ．设正常对照组（8 只）、肾病组（8 只）、MP+CsA+MMF 治疗组（8 只）、 MP+CsA+CTX 治疗组（8 只）和MP+FK506+Rapa 治疗组（8 只）；以丽春红S 法检测24h 尿蛋白定量，全自动生化仪检测血清TP、ALB 、Chol、TG、BUN 、Scr；光镜观察肾组织 病理变化；双抗体夹心ELISA 方法检测血清MMP-2 、MMP-9、TGF-β ；Westernblot 方法 1 检测CTGF 的表达；免疫组化、免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR 检测足细胞nephrin、 podocin 和 CD2 相关蛋白的表达。3 ．设正常对照组（8 只）、肾病组（8 只）、MP+CsA+MMF 序贯治疗组（8 只）、MP+CsA+MMF 联合治疗组（8 只）；以丽春红S 法检测24h 尿蛋 白定量；全自动生化仪检测血清TP、ALB 、Chol、TG、BUN 、Scr 及丙氨酸氨基转移酶（ALT ）、 天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）；光镜观察肝、肾组织病理变化。4 ．在临床上收集行肾穿 刺活检术后明确为原发性肾小球疾病的病理类型，临床表现为肾病综合征，对激素依赖或 抵抗的患者入组，根据个体情况选择序贯治疗方案，监测尿液分析和红细胞位相、24h 尿 蛋白定量，及血清TP、ALB 、Chol、TG 、ALT 、AST 、BUN 、Scr，血药浓度等并跟踪随 访，观察疗效。 结果：1．造模组大鼠24h 尿蛋白定量进行性增加8 周末达高峰。造模组大鼠在2 周末、4 周末、8 周末和12 周末与对照组相比，TP、ALB 随时间延长逐渐降低，TP 在8 周末最低； TG、Chol 随时间逐渐升高，TG 在8 周末最高；BUN 、Scr 无明显变化。造模组在 12 周末 可见部分肾小球出现局灶节段性硬化。造模组随着时间延长，血清中 TGF-β1 的含量升高， 4 周末达高峰；MMP-2 、MMP-9 逐渐降低；肾组织FN 、LN 和CTGF 的表达和分布范围 均显著增加。 2 ．肾病组24h 尿蛋白定量与对照组比较，2 周末、4 周末、8 周末、12 周 末均明显高于对照组（P0.01 ），三治疗组大鼠24h 尿蛋白定量在8 周末、12 周末均明显 I 低于肾病组（P0.05 ），治疗组之间无统计学差异（P0.05 ），但高于对照组。肾病组TP、 ALB 明显低于对照组（P0.01 ），肾病组TG、Chol 明显高于对照组（P0.01 ），治疗组 TP、ALB 明显高于肾病组（P0.05 ），治疗组TG、Chol 明显低于肾病组