槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的探究.pdfVIP

摘要 目的： 以人肺腺癌细胞A549为研究对象，通过不同方法研究槐耳清膏对 A549细胞的生长抑制和诱导凋亡的影响，并初步研究其诱导凋亡的作用 机制，为进一步深入研究其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制奠定基础，也 为应用槐耳清膏治疗肺癌提供理论和基础实验依据。 方法： 应用MTT法检测该药对A549生长抑制作用；倒置相差显微镜、荧 光倒置显微镜下观察A549的形态学变化；离心柱式DNA抽提试剂盒提 取肿瘤细胞DNA后，应用琼脂糖凝胶电泳分析槐耳清膏对A549的凋亡 诱导作用；流式细胞仪检测凋亡细胞以及分析细胞周期；采用免疫印迹法 检测p53，bel．2的蛋白水平变化． 结果： MTT法检测槐耳清膏对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用的结果 发现随着药物浓度的升高而增强，到3mg／ml时达到高峰；随着药物作用 时间延长，细胞生长抑制率随之增加，不同浓度药物作用到36h均达到高 峰，其中3mg／ml槐耳组细胞生长抑制率均值为39．3％，与顺铂阳性对照 细胞在倒置相差显微镜下可以见到细胞变形，细胞膜完整但是周围有发泡 现象，晚期能看到细胞膜皱缩、凹陷，甚至出现凋亡小体；荧光染色可以 看到浓染致密的荧光颗粒，新月形改变，固缩或者片段化的细胞核；DNA 琼脂糖凝胶电泳可见梯形条带；流式细胞术检测可见药物处理后的A549 细胞其DNA直方图上出现亚二倍体的凋亡峰，而且周期分析发现槐耳清 膏能够阻止A549细胞由S期进入G2／M期；免疫印迹法检测显示，槐耳 弱。 关键词： 肿瘤细胞凋亡；槐耳；流式细胞术；免疫印迹；梯形条带 硕士研究生：张畅 导 师：宁 勇 n ofHumanAdenocarinomaCellLineA549Induced Apoptosis Lung Trametes by Robiniophila Specialty：ClinicalLaboratory Diagnostics Author：ZhangChang Tutor：Prof．NingYong Abstract chosehumanadenocarcinomaA549asresearch Objective：We lung object， studiedtheeffectofTrametes inhibitionand Robiniophila(TR)on growth inductionofcell lineA549 different apoptosis using methods，and themechanismof induction will pilot—studied apoptosis TR,whieh by probide abasisforfurther themolecularmechanismof cell investigating lung induced will