槲皮素抗动脉粥样硬化的作用和机制.pdfVIP

目 录 1 槲皮素抗动脉粥样硬化 的作用及机制 …………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………3 1.2 英文摘要………………………………………………………6 1.3 前言……………………………………………………………9 1.4 动脉粥样硬化小鼠模型建立及槲皮素干预研究 1 材料与方法………………………………………………12 2 结果………………………………………………………16 3 讨论………………………………………………………19 1.5 槲皮素抗动脉粥样硬化分子机制研究 1 材料与方法………………………………………………22 2 结果………………………………………………………29 3 讨论………………………………………………………39 1.6 结论……………………………………………………………40 1.7 参考文献………………………………………………………41 1.8 英汉缩略词对照表……………………………………………43 2 致谢……………………………………………………………44 3 高迁移率蛋白 1、Toll 受体与动脉粥样硬化的关系 （综述） …………………………………………………………………45 2 槲皮素抗动脉粥样硬化的作用及机制 摘 要 目的：研究槲皮素抗动脉粥样硬化 （atherosclerosis ，AS ）作用及其机 制，为防治动脉粥样硬化提供实验和理论依据。方法：1.建立动脉粥样硬 化模型：（1）将46只6-8周龄的 ApoE-/-小鼠正常喂养一周后随机分为五组： 正常组 （3只）、对照组 （13只）和实验组（低、中、高槲皮素剂量组，每 组各10只）。（2 ）对照组和实验组喂养高脂饮食，12周后取正常组和对照组 各3只小鼠通过 HE 染色、透射电镜及眼眶取血检测血浆中胆固醇方法检验 动脉粥样硬化形成情况。2.实验组分别给予低剂量槲皮素50mg/ （kg·d)、中 剂量槲皮素100mg/ （kg·d) 、高剂量槲皮素150mg/ （kg·d)喂养，给药后第8 w 、第16w 取对照组和实验组小鼠各5只，并通过 HE 染色和透射电镜、眼 眶取血胆固醇方法检测动脉粥样硬化改善情况。3.采用免疫组织化学技术、 逆转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR ）和ELISA 法检测HMGB1 、 TLR4在槲皮素抗动脉粥样硬化中蛋白和基因的表达。结果：1.高脂饮食12 周后 HE 染色显示主动脉壁厚薄不均匀，内膜增厚, 斑块于内膜表面突起， 其中有脂质和坏死崩解物质混合而成，并见胆固醇结晶、钙化；透射电镜 下显示主动脉内皮细胞水肿明显，局部可见细胞膜破损，可见核周隙结构 扩张，内弹性膜厚度、密度不均匀；检测血浆中胆固醇明显增高 （p ﹤0.05 ）。 动脉粥样硬化模型建立成功。2.低剂量组 HE 染色显示主动脉壁厚薄较均 匀，内膜增厚减轻, 见斑块轻微向内膜表面突起，少许胆固醇结晶、钙化； 透射电镜下显示实验组主动脉内皮细胞无水肿，核膜核周隙结构清晰；内 3 弹性膜厚度及电子密度均匀，内皮表面有异物存积；检测血浆中胆固醇下 降不明显 （p 0.05 ）。3. 免疫组织化学分析显示：在对照组中 HMGB1和 TLR4表达呈强阳性；随着药物剂量的增高，蛋白的表达出现一定程度的下 调 （p ﹤0.05 ），呈剂量依赖性。在8w 时，HMGB1蛋白在低、中剂量两两 比较差异变化不明显 （p 0.05 ），在低剂量和高剂量、中剂量与高剂量两 组间的两两比较有差异 （p 0.05 ），而 TLR-4蛋白在低、中、高三个剂量 组间的两两比较均有差异 （p 0.05 ）。在16w 时，HMGB1和 TLR-4蛋白 表达均有差异，其表达水平均呈不同程度