沉默Bmi-1表达对A549细胞增殖及侵袭转移作用.pdfVIP

沉默Bmi．1表达对A549细胞增殖和侵袭转移的作用 硕士生姓名：郑翔宇 指导教师：孟秀香教授 专业名称：,15 断学 摘要 目的：原癌基因Bmi．1是多梳基因家族中的一员，能调节正常干细胞和肿瘤 干细胞的自我更新能力。近年来发现其在多种恶性肿瘤中表达上调。本研究选择 高表达Bmi．1基因但缺乏INK4a／ARF位点的肺腺癌细胞系A549作为研究对象， 通过沉默Bmi．1基因的表达，来观察其对A549细胞增殖和侵袭转移的作用，并探 讨其可能参与增殖与侵袭转移的可能信号传导通路。 方法：l、本实验室在前期工作中，构建了四条Bmi．1siRNA，将其转染至HeLa 细胞中发现四条链均有抑制HeLa细胞增殖与转移的作用，本实验选择一条最有效 的序列作为靶序列和一条随机序列作为阴性对照，合成干扰片段和阴性对照片段， 重组载体转染入A549细胞中，筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养。3、应用 RT．PCR和WesternBlot方法检测对Bmi．1基因的沉默效果。4、应用MTT比色 法、台盼蓝拒染法及平板克隆形成实验检测沉默Bmi．1基因的表达后对A549细胞 增殖的影响。5、利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期。6、应用Transwell实 验检测沉默Bmi．1基因表达后对A549细胞体外迁移能力的影响。7、应用侵袭实 验检测沉默Bmi．1基因表达后对A549细胞体外侵袭能力的影响。8、通过裸鼠腋 窝皮下接种各组细胞，观察沉默Bmi．1表达后A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力的 影响。9、将各组细胞从尾静脉注射到裸鼠体内，观察沉默Bmi．1基因表达后对 0、western A549细胞转移能力的影响。1 的表达。 和蛋白的表达。2、MTT及流式细胞仪结果显示，沉默Bmi．1基因的表达能够抑制 A549细胞的增殖，细胞周期阻滞于Gl期。3、克隆形成实验表明沉默Bmi．1基因 的表达明显抑制了A549细胞的单细胞增殖能力。4．、沉默A549细胞Bmi．1基因 的表达后在体外能明显抑制其转移侵袭能力。5、体内成瘤实验表明沉默A549细 胞Bmi．1基因表达后使A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力下降。6、沉默A549细 胞Bmi．1基因表达后在裸鼠体内能抑制A549细胞的肺部转移能力。7、沉默Bmi一1 MMP-2、MMP．9和VEGF分泌减少。 ． 结论：沉默Bmi．1基因表达在体外抑制了A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力， 在体内减弱了裸鼠成瘤能力，我们推测，Bmi．1在调控INK4a／ARF位点缺失的A549 1表达的方式参与该类肿瘤 等肿瘤细胞中，可经由非经典下游位点来调控cyelinD 移密切相关，其参与该肺腺癌细胞的侵袭与转移有可能是通过调控MMPs及VEGF 来完成的，而不是通过上皮细胞间质化(EMT)来实现的。 关键词：A549细胞Bmi．1基因增殖侵袭转移 2 Theeffectsof Bmi-1onthe silencinggene proliferation， andanoinvasioninvaSlonCancercelllinellneA metastasis of’ung：ancer,elllung Master degreecandidate：ZhengXiangyu Xiuxiang Supervisor：Prof．MENG Major：LaboratoryMedicineDiagnostics Abstract routin