松脂醇二葡萄糖苷药代动力学和代谢产物分析研究.pdf

Studies On The Pharmacokinetics And The Metabolites Of Pinoresinol Diglucoside A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Yang Zhongjie Supervisor: Associate Prof. Cheng Tiefeng May ，2015 摘 要 松脂醇二葡萄糖苷(Pinoresinol diglucoside ，PDG)是从杜仲中提取出来的木脂素类 化合物，对血压具有升压和降压的双向调节作用，主要起降压作用。关于杜仲提取物 药理活性及作用机理已有报道，但松脂醇二葡萄糖苷的体内药代动力学及主要代谢产 物的研究目前尚少。 本文拟在研究其在大鼠体内的药代动力学与排泄情况，并进一步研究松脂醇二葡萄 糖苷及其代谢物的规律。本文建立了快速、灵敏并且专属性强的高效液相色谱- 电喷雾 质谱(UPLC-ESI/MS/MS)分析方法，测定大鼠血浆及尿液中松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇 （Pinoresinol ，PIN ）、肠内脂(Enterolactone，ENL) 、肠二醇(Enterodiol，END) 的含量， 并且探讨了 PDG 的药代动力学特征和排泄。为了进一步揭示松脂醇二葡萄糖苷在大鼠 体内的代谢转化情况，为探讨其体内药效的物质基础和新药开发打下基础，本文对松脂 醇二葡萄糖苷在大鼠体内的代谢产物进行了深入的研究，采用高分辨率质谱对松脂醇二 葡萄糖苷的代谢物进行确证。 一、血浆样品中松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇、肠内脂和肠二醇的 UPLC-ESI/MS/MS 分 析方法的建立 通过对色谱和质谱条件进行优化，并建立了同时测定血浆样品中上述四种药物的超 高效液相色谱- 电喷雾质谱联用法，最后对分析方法进行了确证。结果表明：PDG 、PIN 、 2 ENL 和END 均在1-1000 ng/mL 浓度范围内线性关系良好(r 0.992) ，定量限为1ng/mL， 提取回收率重现性好，日内和日间的RSD 、R.E 均小于15%。实验确认了该方法分析速 度快，简便，专属性强，灵敏度、准确度高，并且稳定性好，满足本实验药代动力学研 究中样品分析的需要。 二、松脂醇二葡萄糖苷及其三种代谢产物在大鼠体内的药物动力学研究 本论文采用 UPLC-ESI/MS/MS 法测定了大鼠血浆中松脂醇二葡萄糖苷及其三种代 谢产物的浓度，进行松脂醇二葡萄糖苷灌胃给药后在大鼠体内的药代动力学研究。结果 显示: Cmax 为 638.43±43.52 ng/mL，Tmax 为 0.089±0.02 h，AUC(0-∞)为 2354.42±832.94 ng/mL·h ，t1/2α 为1.17±0.24 h，V/F 为31.01±2.03 L/kg，CL/F 为16.69±1.09 L/h/kg，表明 I 松脂醇二葡萄糖苷灌胃给药的体内代谢过程符合二室模型。其他三种代谢产物只在 12-48 小时检测到微量。 三、松脂醇二葡萄糖苷及其三种代谢产物在大鼠体内的排泄研究 利用UPLC-ESI-MS 分析方法测定松脂醇二葡萄糖苷及其三种代谢产物在给药大鼠 尿液中含量，并考察大鼠尿液中松脂醇二葡萄糖苷的累计排泄规律;结果显示灌胃给药后 松脂醇二葡萄糖苷在0-60h 有27.45±2.51% 以原形形式经尿液排出体外，有