两种荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-21的应用探析.pdfVIP

两种荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR．21的应用分析 中文摘要 Green 目的：应用SYBR 通过两种方法的比较，选择精确度高，成本相对较低，更加适用于临床的miRNA检测 方法。 方法：收集2010年度遵医附院普外科收治的14位乳腺癌患者的乳腺癌及癌旁组织作 Green 再分别用SYBR I染料和TaqMan荧光探针作为指示剂，实时荧光定量PCR检测 Green I染料法与 miR．21在乳腺癌及癌旁组织中的相对表达水平。应用统计学分析SYBR Blot法进行实验验证。 TaqMan探针法检测结果间的差异，最后用Northern 结果：提取的总RNA经1％琼脂糖电泳显示明显的28s和18s 解曲线单一，表明其特异性好。u6及miR．21的扩增曲线符合PCR扩增规律，结果可靠。 Green 经统计学分析，SYBR I染料法检测癌组织与癌旁组中的miR．21，经配对t检验显 示组间结果有显著性差异(t=6．704 性差异(t=7．238 分析两种方法的结果间数据无显著性差异(PO．os)。NorthernBlot实验结果与上述 结果接近，证明其结果可靠。 Green 结论：1．在扩增产物特异的条件下，应用SYBR I染料法检测miRNA的灵敏度和 GreenI染料法是一种 特异性与TaqMan探针法相近，结果间无显著性差异。由于SYBR 简单、有效、实用，应用范围广，成本相对较低，是更加适用于临床的miRNA检测方 法。 说明miR．21表达上调与乳腺癌有一定的相关性。 SYBRGreen 关键词： 乳腺癌； miR．21； Northern PCR： Blot： ofmicroRNA-21inbreast Comparison cancertissue resultswithtwofluorescent PCRmethods quantitative Abstract SYBRGreenI fluorescentmethodand Objective：Application dyes TaqMan methodtodetect probe breastcancertissue the ofthetwo miR一21，Through comparison toselectthe methods，We lower to expect higher precision，relativelycost，moreapplicable clinicaImiRNAtest methods． Methods：HereweCollectA totalof14casesofbreastcanc