内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞调亡中的影响.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………l 英文摘要……………………………………………………………………5 研究论文 内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用 前言……………………………………………………………………．9日IJ舌 ……………………………………………………………………． 材料与方法……………………………………………………………9 结果 …………………………………………………………………．．13 附图 …………………………………………………………………．．15 附表…………………………………………………………………．．33 讨论…………………………………………………………………．．37 结论…………………………………………………………………．．41 参考文献……………………………………………………………．．4l 综述 内质网应激在酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用…………………．．44 致谢…………………………………………………………………………59 个人简历…………………………………………………………………．60 中文摘要 内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用 摘 要 liver 目的：酒精性肝病(alcoholic 起的中毒性肝脏疾病。其包括轻症ALD、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒 精性肝纤维化和酒精性肝硬化等类型。ALD的发病机制复杂，目前尚不完 reticulum 全清楚，内质网应激(ehdoplasmic 胞凋亡可能在其中发挥重要作用。 ERS指由于各种原因导致细胞内质网生理功能发生紊乱，钙稳态失 衡，错误折叠或未折叠的蛋白质在内质网腔内聚集的一种亚细胞器的病理 状态，它是使错误的蛋白质恢复正确构象并能够进一步加工的必需步骤。 ERS是体内的一种自我保护机制，但如果ERS反应过强或持续时间过长， 肝细胞所受损伤过于严重，则会启动细胞凋亡程序，最终导致肝细胞凋亡， 从而加重肝脏病变。 emia，Hhcy)可诱发ERS。胱硫醚p合成酶(cystathionine 为吡哆醛磷酸依赖性酶，主要在肝脏中合成，是同型半胱氨酸(homocyste． ine，Hcy)代谢过程中的关键酶，其活性的降低可能是导致高同型半胱氨 protein， 量表达，与未折叠蛋白结合，恢复蛋白质的正确构象。因此，GRP78被认 为是ERS的标志性分子。ERS介导的肝细胞凋亡过程包括细胞内钙稳态失 衡及一系列的酶促反应和信号转导。需钙蛋白酶2(calpain 是存在于肝细胞中的半胱氨酸蛋白酶类，可能在此过程中发挥重要作用。 本研究拟用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型，检测血清总同型半 法检测肝组织中GRP．78、calpain 应用TUNEL染色法检测肝细胞凋亡。以探讨内质网应激及其介导的肝细 胞凋亡在大鼠酒精性肝病中发挥的作用。 中文摘要 分出10只为对照组，其余动物采用逐渐增加酒精浓度(浓度30％．60％，乙 肝组织冰冻切片行苏丹Ⅳ染色，观察肝细胞脂肪变性情况；另取肝组织制 染色、过碘酸希夫染色(PAS)，观察肝组织普通病理改变，纤维化程度 和肝组织胞浆糖原变化；分别用免疫组织化学染色及逆转录聚合酶链反应 (reverse chain transcription．polymerase 肝组织中GRP．78、calpain 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞 凋亡。 结果： 1血清肝功能指标的变化：随着造模时间的延长，血清ALT和AST水平 逐渐升高，CHE水平降低，与正常对照组比较P0．05或P0．01。 的水平逐渐升高，HDL水平逐渐降低，与正常对照组比较P0．05或 P0．0l。 3肝组织病理学改变：光镜下，HE染色显示对照组肝组织肝细胞索以肝 小叶中央静脉