凝血因子Ⅶ启动子区甲基化调控基因表达及及颅脑创伤后进展性出血性损伤相关性研究.pdfVIP

凝血因子VII 启动子区甲基化调控基因表达及与颅脑创伤后进展性出血性损伤相关性研究 中文摘要 凝血因子 VII 启动子区甲基化调控基因表达及与颅脑创 伤后进展性出血性损伤相关性研究 中文摘要 本课题分三部分 ，第一部分从临床角度阐述单纯性颅脑创伤 （traumatic brain injury，TBI ）患者血浆凝血因 VII 活性 （coagulation factor VII activity，CFVIIa ）水 平与颅内进展性出血性损伤 （progressive hemorrhagic injury ，PHI ）的相关性；第二 和第三部分分别从细胞和临床角度研究凝血因 VII （coagulation factor VII，CFVII ） 启动子区甲基化对 CFVII 基因表达调控作用及与 PHI 的相关性。各部分研究摘要如 下： 第一部分 单纯性颅脑创伤患者血浆凝血因子 VII 活性水平与颅内进展性出血性损伤的相关性 目的：研究单纯性 TBI 患者血浆 CFVIIa 水平与 PHI 的相关性。 方法：根据研究纳入和排除标准选取 2010 年 8 月至 2014 年 6 月在上海华山医院 神经创伤中心急诊入院的年龄 ≥17 岁的中重度单纯性 TBI 患者 2 例，采集患者入 院时外周静脉血标本并送检国际标准化比值 （ international normalized ratio ，INR ）、 活化部分凝血活酶时间 （activeated partial thromboplasting time ，APTT ）、血小板 （platelet ，PLT ）、D-二聚体、纤维蛋白原 （fibrinogen ，FIB ）及 CFVIIa 。每 24 h 随 访患者头颅 CT 一次，当再次 CT 扫描较首次 CT 扫描显示的出血性病灶扩大或有新 出现的出血性病灶时被诊断为 PHI 。 结果：PHI 组患者血浆 CFVIIa 及 PLT 水平均显著低于非 PHI 组（77.79% ± 22.82% VS 100.32% ± 30.39% ；126.95 ± 48.46 VS 148.13 ± 53.4 ；P 0.05 ）；PHI 组患者血浆 APTT 、INR 、D-二聚体、FIB 均高于非 PHI 组，但两组之间差异不明显 （P 0.05 ）。 Logistic 回归分析，结果显示血浆 CFVIIa 低下 （OR =1.06 ，95% CI =1.03～1.10，P 0.00 ）及 PLT 水平降低 （OR =1.0 ，95%CI =1.00～1.02，P =0.009 ）是单纯性 I 中文摘要 凝血因子VII 启动子区甲基化调控基因表达及与颅脑创伤后进展性出血性损伤相关性研究 TBI 患者发生 PHI 的独立危险因素。 结论：：单纯性 TBI 后 PHI 患者血浆 CFVIIa 及 PLT 水平均显著低于非 PHI 患者， ：： 血浆 CFVIIa 低下及 PLT 水平降低是单纯性 TBI 患者发生 PHI 的独立危险因素。 第二部分 凝血因子 VII 启动子区甲基化调控凝血因子 VII 表达 目的：研究 CFVII 基因启动子区甲基化对 CFVII 表达调控作用 。 方法：基因合成 CFVII 启动子区-781- -1bp 及-1000- -1 bp 两条片段，并将上述片 段亚克隆至 PGL3-basic 载体，获得重组质粒 PGL3-F7UM-781- - 、PGL3-F7UM-1000- - 。酶切、测序验证无误后，用甲基化转移酶 （M.SssI，NEB ）对重组质粒、PGL3-Basic 、 PGL3-Control 质粒进行全甲基化修饰