大黄鱼（Larimichthys crocea）IL-10基因的克隆与表达分析.pdfVIP

第39卷 第4期 海 洋 学 报 v01．39，NO．4 2017年 4月 HaiyangXuebao April2017 郑维兵，慕鹏飞，丁连帅，等．大黄鱼(LarimichthyscFocea)IL-10基 因的克隆与表达分析 [J]．海洋学报 ，2017，39(4)：5O 6O，doi： 10．3969／j．issn．0253—4193．2017．04．005 ZhengW eibing，MuPengfei，DingLianshuai，eta1．Cloningandexpressionanalysisoflargeyellow croaker(Larimichthysrocea)IL- 10gene-[J2．HaiyangXuebao，2017，39(4)：5O一6O，doi：10．3969／j．issn．0253—4193．2017．04．005 大黄鱼 (Larimichthyscrocea)IL-IO基因的 克隆与表达分析 郑维兵 ，慕鹏飞 ，丁连帅 ，杨思司 ，敖敬群 ，艾春香 ，陈新华 (1．国家海洋局第三海洋研究所 海洋生物遗传与资源重点实验室，福建 厦 门361005；2．厦 门大学 海洋与地球学院， 福建 厦门 361005) 摘要：白细胞介素 10(Interleukin10，II『10)是一种抗炎细胞因子，可以抑制机体免疫反应。本研究经 过分析大黄鱼基因组数据库发现了IL-10同源基因，并对其cDNA编码 区序列和基因组DNA序列进 行了克隆分析。大黄鱼II：lO(LycIL-10)基因由5个外显子和4个 内含子构成，其序列全长1869bp， 其开放阅读框 (ORF)长555bp，编码 184个氨基酸，其N端的22个氨基酸残基为预测的信号肽，成熟 肽由162个氨基酸残基组成，包含了脊椎动物 IL-10标志性保守序列。LyclL-10的氨基酸序列同其他 已知物种的IL-10氨基酸序列的一致性为26．49 ～77．01％。Real—timePCR分析发现 LyclL-10在 检测的组织中为组成型表达 ，在脾脏和肌肉中转录水平相对较高。三联灭活细菌疫苗和聚肌苷酸胞 苷酸(poly(I：C))刺激后，大黄鱼头 肾和脾脏 中LyclL-10mRNA的转录水平会显著升高，表明Ly— clI10可能参与抑制大黄鱼由细菌和病毒引起的炎症反应。 关键词：大黄鱼；白细胞介素 10；分子克隆；实时定量 PCR；表达分析 中图分类号 ：S917．4 文献标志码 ：A 文章编号 ：0253—4193(2017)04—0050—11 是通过抑制活性氧 (R0S)和 NO产生 、降低 MHCII 1 引言 和一些巨噬细胞分泌的炎症因子 (II1、TNF-a、IL-12 白细胞介素 10(Interleukin-10，IL厂10)，又称细胞 和环氧酶 2等)的表达从而抑制机体针对病原体入侵 因子合成抑制因子，最初因其由Th2细胞分泌，并可 产生的免疫反应l4 。在 T细胞分化 的过程 中 IL 以抑制 Thl细胞合成与分泌 IL-2和 IFN-v而被发 10也发挥重要作用，其通过抑制 Thl细胞因子 IFN-V 现，是一种有效的抗炎因子 ，主要 由单核 ／巨噬细胞和 和 IL-2的表达来促进 T细胞向Th2分化l1卜]。 Th2细胞合成分泌 ¨】 。除此之外 ，T细胞的其他亚 目前已经有多种哺乳动物的 II，1O基因被克隆 群、B细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞、角质细胞 、问质 并研究 ]，哺乳动物 IL-10含 6个 a螺旋和2个分 细胞、自然杀伤性细胞 (NK细胞)和肿瘤细胞等也可 子内二硫键，通常以非共价键结合形成同源二聚体的 以分泌 I[．-10]。由于 IL-10