甲泼尼龙减轻水通道蛋白4抗体对体外培养鼠皮层星形胶质细胞及神经元的毒性作用.pdfVIP

中文摘要 甲泼尼龙减轻水通道蛋白4抗体 对体外培养鼠皮层星形胶质细胞和神经元的毒性作用 摘 ’要 目的：视神经脊髓炎(Neuromyelitis 神经和脊髓的中枢神经系统炎性脱髓鞘性疾病。多年来医学界对NMO是 多发性硬化(Multiple NMO发病机制中发挥重要的作用，NM0是一种抗体介导的体液免疫性 的同时也降低AQP4抗体滴度；病理研究表明NMO新鲜病灶中广泛缺乏 星形胶质细胞和AQP4染色；体外研究也证实AQP4抗体和星形胶质细胞 特异性的结合导致AQP4内陷，增加血脑屏障的通透性，损害钠依赖性谷 氨酸传递，产生补体依赖性细胞毒性。但这些体外研究多为纯星形胶质细 胞培养或AQP4转染细胞培养，AQP4抗体对混合细胞培养中星形胶质细 胞和神经元的毒性作用尚无研究。另外临床研究已经证实小剂量强的松口 服能减少NMO的复发，提示肾上腺皮质激素可能通过免疫抑制作用、抗 炎、减轻细胞水肿等发挥其对NMO的治疗作用。故本研究通过大鼠皮层 原代细胞培养，首先观察不同滴度的NMO患者AQP4抗体阳性血清对大 鼠皮层神经细胞的毒性作用；其次探讨甲泼尼龙对AQP4抗体诱导的神经 毒性是否有保护作用。 方法： 1原代培养3天的新生Wistar大鼠大脑皮层神经细胞，分别加入正常对 培养6小时后使用细胞免疫荧光染色法观察各组星形胶质细胞和神经元 的形态学及数量变化。 2原代培养3天的新生Wistar大鼠大脑皮层神经细胞，随机分为4组： 中文摘要 +1：1000血清组，分别加入对应的血清或／和甲泼尼龙，培养6小时后使用 细胞免疫荧光染色法观察各组星形胶质细胞和神经元的形态学及数量变 化。 结果： 1荧光显微镜下形态学观察，对照组细胞体外形清晰，突起粗壮；加入 AQP4抗体阳性血清6h后大鼠大脑皮层星形胶质细胞均可见肿胀，突起 减少、缩短及断裂；神经元细胞也出现突起减少、断裂、长度不完整等表 现。单独甲波尼龙处理组并不引起明显的星形胶质细胞和神经元形态学变 化，而甲波尼龙预处理组能明显减少这种形态学改变。 2原代培养的大鼠大脑皮层细胞暴露于不同滴度的AQP4抗体阳性血清 与对照组相比，其余三组细胞数量均有不同程度的减少，单因素方差分析 组相比，其余三组细胞数量均有不同程度的减少，单因素方差分析显示各 组之间差异有统计学意义(F值为71．41，P均O．05)。 42．11 的星形胶质细胞和神经元数目(分别为44．52±3．71％矛I4-5．94％)较 l：1 000血清组(分别为24．68±3．40％矛I23．35±2．65％)明显增多，差异 有统计学意义(P均O．05)。同时我们也发现单独甲波尼龙预处理会导致 44．93+2-39％，P=0．42)。 结论： 1在体外大鼠大脑原代皮层细胞培养中，AQP4抗体阳性血清对星形胶质 细胞和神经元有滴度依赖性的细胞毒性作用。 2甲泼尼龙预处理可以减轻AQP4抗体阳性血清诱导的大鼠皮层星形胶 质细胞和神经元的细胞毒性。 ． 中文摘要 抗体及激素治疗NMO提供了理论证据。 关键词：视神经脊髓炎；水通道蛋白4抗体；原代细胞培养；星形胶 质细胞；神经元；甲泼尼龙 英文摘要 attenuates Methylprednisolone aquaporin--4 inculturedratcortical andneurons cytotoxicity astrocytes ABSTRACT a severe Objective：Neuromy