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米诺环素对癫痫大鼠的保护作用及机制的实验研究 米诺环素对癫痫大鼠的保护作用及机制的 实验研究 硕士研究生：吴照明 指导教师：杨炼红副教授 摘要 研究背景 癫痫是一组由大脑神经元异常放电所引起的、以短暂性中枢神经系统功能 失常为特征的慢性脑部疾病，是神经科常见病、多发病之一．目前，癫痫的治 疗绝大多数依靠抗癫痫药物，但仍有20％4096的患者发作难以控制。常用的抗 癫痫药物的作用机制比较单一，难以全面控制癫痫发病时的复杂的病理过程。 因此，对癫痫的发病机制和病理过程进行深入研究有助于探索新的治疗手段、 寻找能够让常用抗癫痫药物无效或无法耐受的难治性癫痫患者长期安全而有效 地使用的药物。 近年来，国内外许多研究证实，癫痫发作后脑内各种酶、神经递质，氨基 酸等化学物质迅速变化，可导致脑细胞水肿，造成神经元凋亡。对各种癫痫模 型的研究表明，癫痫发作可导致海马、杏仁核、大脑皮质、丘脑、小脑等部位 的神经元丢失，有明显的细胞凋亡，其中海马CA3、CAl区的凋亡细胞在发作后 24小时达最多，且持续3周。在手术中获取癫痫病人的脑组织进行病理活检， 发现其有明显的神经细胞凋亡和胶质细胞增生。无论在人类难治性颞叶癫痫患 者中，还是在难治性癫痫动物模型中，海马的CAl、CA3区神经细胞凋亡现象均 极为严重。本课题组最近的一项研究的初步结果也发现，在大鼠癫痫模型中， 海马神经元凋亡明显增多，用转bcl—xl基因治疗癫痫模型的大鼠，抗凋亡基因 bcl-xl基因的高度表达在离体和体内状态下均可明显减少海马区神经元的丢 失，减少癫痫的临床发作次数。可见，细胞凋亡是引起癫痫的长期、反复发作 形态学基础之一，减少神经细胞的凋亡在癫痫的治疗中将起着重要的作用，可 米诺环素对癫痫大鼠的保护作用及机制的实验研究 为癫痫发作的更好控制提供新的治疗途径。 素类药物具有较高亲脂性，容易透过血脑屏障到达中枢神经系统，动物模型研 究表明Mc在脑中可以达50％的血药峰浓度。近年研究发现，米诺环素在中枢 神经系统损伤和多种神经系统疾病的动物模型实验中，具有抗凋亡、抗炎、抗 氧化等神经保护作用。但目前关于米诺环素的研究主要集中于脑缺血、脊髓损 伤、帕金森氏病、阿尔茨海默病、肌萎缩性(脊髓)侧索硬化及亨廷顿氏病等方 面，米诺环素与癫痫方面的研究尚少有报道。本课题组之前已经证实米诺环素 对体外培养的大鼠海马神经元凋亡有保护作用。那么，米诺环素对在体的大 鼠海马神经元是否有保护作用呢?若有保护作用，其作用机制是什么? 研究目的 构建青霉素诱导的大鼠急性癫痫模型，然后用米诺环素对癫痫大鼠进行干 预，观察癫痫大鼠的行为学变化、发作潜伏期、发作程度、发作次数和死亡率， 估其对癫痫大鼠的保护作用。 资料和方法 选择成年健康雄性SD大鼠170只，随机分成4组：I提前给药组(n=50)，II 治疗组(n=50)；HI癫痫组(n=50)：IV空白对照组(n=20)。 实验分两步进行： 第一步，用青霉素诱发癫痫大鼠模型即癫痫组，与空白对照组相比，观察和 比较两组大鼠的行为表现、脑电图改变和组织学变化，并于不同时间(1d、3d、 7d、14d)处死大鼠，收集海马组织以备用。 第二步，提前给药组为用米诺环素(60mg／Kg体重灌胃)提前给药7天，再用 青霉素诱发癫痫发作后继续用米诺环素治疗；治疗组为用青霉素诱发癫痫发作后 行米诺环素(60mg／Kg体重灌胃)治疗，诱发癫痫后观察4小时内大鼠行为学变化， 记录癫痫发作潜伏期、发作次数、发作程度和死亡率，分别于1d、3d、7d和14d 分批处死大鼠，开颅取海马，对海马组织行HE染色、TUNEL染色观察海马区神经 的表达，用Westernblot法检测海马组织中Caspase-3的表达。比较各组间上述 Ⅱ 米诺环素对癫痫大鼠的保护作用及机制的实验研究 观察指标的差异。 采用SPSS11．5统计软件进行数据分析，计量资料数据采用均数±标准差(X ±S)表示，样本间均数比较采用单因素方差分析进行分析，频数表资料采用2 独立样本的非参数检验进行分析，两个样本率的比较采用四格表资料的x?检 验，PO．05为差异有统计学意义。 结果