类风湿性关节炎小鼠模型的制备和刺五加皂苷E对其治疗作用的研究.pdfVIP

类风湿性关节炎小鼠模型的制备及刺五加皂苷E 对其治疗作用的研究 中文摘要 类风湿性关节炎小鼠模型的制备及刺五加皂苷E 对其治疗作用的研究 中文摘要 目的：采用皮下注射牛II 型胶原蛋白（CII ）的方法建立一种有效、实用的类风 湿性关节炎小鼠模型，并通过观察小鼠的体重变化、关节大体评分、关节影像学评分、 血清中抗 II 型胶原抗体水平、血清中炎性细胞因子的水平等指标，评价不同剂量组 刺五加皂苷E （EE ）对类风湿关节炎模型小鼠的治疗效果，并通过研究刺五加皂苷E 对巨噬细胞分泌细胞因子的影响来探讨其可能的作用机制。 方法：①饲养SPF 级雄性DBA/1 小鼠，7～8 周龄，体重18～25g，将牛II 型胶 原和弗氏完全佐剂混合乳剂在背部经皮下注射诱导，三周后将牛 II 型胶原和弗氏不 完全佐剂混合乳剂在尾根部经皮下注射诱导，建立胶原诱导类风湿关节炎的小鼠模 型。 ②将模型小鼠随机分为5 组，对雷公藤（TG ）组（15 mg/kg）、低剂量EE 组（15 mg/kg ）、中剂量EE 组（30 mg/kg ）、高剂量EE 组（60 mg/kg ）小鼠进行灌胃治疗， 模型组小鼠给予溶媒灌胃。 ③动态观察不同治疗组CIA 模型小鼠的症状和体征（包括体重、关节肿胀程度）、 影像学改变、组织病理学改变，并且于不同时间点对各组小鼠进行采血，测定血清细 胞因子的水平和抗II 型胶原抗体的水平。 ④体外培养THP-1 细胞，加入不同剂量的刺五加皂苷E 共孵育，检测细胞上清 中细胞因子TNF-α、IL-6 的水平，讨论刺五加皂苷E 对细胞因子产生的影响。 结果：①用牛II 型胶原蛋白免疫DBA/1 小鼠诱导类风湿性关节炎的方法可靠， 发病时间齐，发病率高。 ②与CIA 模型组比较，30 mg/kg 和60 mg/kg 刺五加皂苷E 治疗组小鼠关节炎 评分降低，体重减轻的程度减少，后爪肿胀程度也明显减轻（P0.01 ）；15 mg/kg 刺 I 中文摘要 类风湿性关节炎小鼠模型的制备及刺五加皂苷E 对其治疗作用的研究 五加皂苷 E 治疗组的小鼠关节炎评分和体重减轻的程度以及后爪肿胀度也降低，但 统计学差异不显著（P0.05 ）。 ③钼靶 X 线光片和 micro-CT 检查发现：CIA 模型组小鼠关节结构破坏，关节 间隙消失，骨质表面粗糙；刺五加皂苷E （30 mg/kg 和60 mg/kg ）治疗组中小鼠的骨 质破坏程度均明显降低，小鼠骨质破坏程度的计分也明显降低（P0.01 ），而刺五加 皂苷E （15 mg/kg）治疗组并没有表现出明显的改善（P0.05 ）。 ④HE 染色结果显示：CIA 模型组小鼠滑膜中有明显的炎细胞浸润、血管翳形成、 软骨破坏和骨侵蚀；刺五加皂苷E （30 mg/kg 和60 mg/kg ）治疗组小鼠滑膜中炎细胞 浸润程度减轻，血管翳数量明显降低，软骨破坏及骨侵蚀的程度也明显的被抑制，而 刺五加皂苷E （15 mg/kg）治疗组变化并不明显。 ⑤抗II 型胶原抗体水平结果显示：CIA 模型组小鼠血清中抗II 型胶原抗体水平 很高；刺五加皂苷E （30 mg/kg 和60 mg/kg ）治疗组小鼠血清中抗II 型胶原抗体水 平明显降低（P0.01 ）；刺五加皂苷E （15 mg/kg）治疗组小鼠血清中抗II 型胶原抗 体水平也明显降低，差异有统计学意义（P0.001 ）。 ⑥细胞因子水平结果显示：刺五加皂苷E 治疗组小鼠血清中TNF-α、IL-6 和IL-23 的水平较CIA 模型组明显降低，差异有统计学意义（P0.05 ）。IL-17 水平虽有所降 低，但差异没有统计学意义。 ⑦体外实验结果表明：刺五加皂苷E 对巨噬细胞无毒副作用，并能抑制巨噬细胞 的活化，使炎性细胞因子TNF-α 和IL-6 的分泌减少，且呈时间和剂量的依赖性，与 对照组相比，差异有统计学意义（P0.05 ）。 结论：