肉桂醛氧氟沙星酰腙诱导人胰腺癌细胞凋亡作用的探究.pdfVIP

摘 要 胰腺癌是临床发病隐匿、发展迅速、预后极差的一种恶性肿瘤。受胰腺与 周围组织及器官的解剖学关系的影响，早期发生周围组织、器官侵犯和远处转 移。由于早期无明显的特异性症状和体征，并缺乏可靠的早期诊断方法，确诊 时多属晚期，预后极差，约有 83%的患者 1年内死亡。目前认为早期手术切除 是胰腺癌唯一的可治愈性方法, 但 85%的胰腺癌患者就诊时已属晚期或发生转 移 手术切除率仅, 10%-15%，因此化疗在胰腺癌综合治疗中尚占有重要的位置， 需要研究开发新的药物以改善疗效。 喹诺酮类化合物是临床常用的抗菌药物，这类药物作用于细菌 DNA回旋酶 （gyrase），抑制细菌 DNA 复制、转录及损伤修复等过程，抑制细菌增殖并杀 灭细菌，临床应用效果良好。由于真核细胞的拓扑抑构酶Ⅱ（topoisomerase Ⅱ,TopoⅡ）与细菌 DNA回旋酶的活性部位酪氨酸残基周围的序列具有同源性， 二者催化功能相似。因此，人们希望通过结构改造能够合成抑制哺乳动物拓扑 抑构酶Ⅱ活性的喹诺酮类抗肿瘤药物。本研究利用酰胺类化合物取代氟喹诺酮 羧酸的 C-3羧基合成的氧氟沙星 C-3酰腙衍生物，探讨该类化合物对人胰腺癌 BxPC-3细胞的增殖抑制和促凋亡作用，以期筛选出治疗胰腺癌的候选药物，并 为进一步开发和利用提供实验依据。 目的 通过对 13种喹诺酮衍生物的初步筛查，寻找对人胰腺癌 BxPC-3 细胞增殖有显著抑制作用的化合物，对其作用机制进行初步研究，为该类化合 物的开发利用提供理论依据 。 方法 MTT 法检测化合物对 BxPC-3增殖的抑制作用；Hoechst33258/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡核形变化；TUNEL 法观察细胞凋亡并检测细胞凋 I 亡率；DNA 琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞特征性梯状 DNA 条带；Western-blot 检测细胞凋亡相关蛋白表达的变化。 结果 MTT 法测定 13种化合物对胰腺癌细胞株 BxPC-3细胞增殖的抑制作 用。其中 FQ4、FQ16 两种化合物对该细胞增殖具有显著的抑制作用，在 -1 -1 0.625μmol·L ~10μmol·L 的浓度范围内能显著抑制细胞增殖。FQ16对 BxPC-3 细胞增殖抑制作用最强且呈浓度、时间依赖关系，作用于细胞 24h的 IC 值是 50 -1 4.00μmol·L ；Hoechst33258/PI 荧光染色观察细胞形态学变化，显示凋亡细胞染 色质凝集、细胞核碎裂和凋亡小体形成等典型细胞凋亡特征性变化，晚期凋亡 -1 细胞可见 PI染色。FQ16达 4.00-6.37μmol·L 浓度作用细胞 24h，DNA 琼脂糖 凝胶电泳显示凋亡细胞典型的梯状 DNA 条带。TUNEL 实验统计细胞凋亡率显 著高于对照组（P﹤0.05）；Western blot 结果显示，p53、bax、caspase-8、caspase-9 和 caspase-3 蛋白量表达较对照组升高，bcl-2 蛋白表达量降低。caspase-8、 caspase-9 活性裂解片段显著增加，线粒体细胞色素 c降低，胞浆细胞色素 c 升 高。 结论 1.FQ16显著抑制胰腺癌 BxPC-3细胞增殖作用，其抑制作用效果呈浓度和 时间依赖性。 2.FQ16能够诱导胰腺癌 BxPC-3细胞凋亡，此作用与线粒体凋亡通路有关。 关键词 关键词 关关键键词词 肉桂醛氧氟沙星酰腙，胰腺癌，细胞增殖，凋亡，细胞色素 c II Abstract Pancreatic cancer is a kind of malignant tumor with the clinical onset concealment, the rapid development and poor prognosis. By the inf