胶质瘤来源的Exosome冲击树突状细胞体外诱导特异性CTL的初步探究.pdfVIP

中文摘要 初步研究 摘 要 目的：旨在证实胶质瘤原代细胞可以分离出外来体，从外周血诱导分 离能够培养出树突状细胞，将胶质瘤细胞培养液分离出的外来体致敏树突 状细胞，观察其体外所引起的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。 方法：选取临床上高度恶性胶质瘤标本，制作成单个胶质瘤细胞悬浮 液，将悬浮液分成两份，取其中一份进行原代细胞培养，收集培养两周的 细胞培养液，采用差速离心法分离出胶质瘤细胞所分泌的外来体；取另一 份胶质瘤单个细胞悬浮液，通过反复离心和冻融的方法制备出胶质瘤冷冻 抗原；采取同一患者外周血，利用淋巴细胞裂解液并采用离心的方法，从 外周血中获取单核细胞,UT淋巴细胞，其中这些单核细胞在细胞因子IL一4、 GM．CSF作用下进行培养，使其转变成为不成熟的树突状细胞，然后添加 细胞因子TNF—Q继续培养，使其变为成熟的树突状细胞；将胶质瘤来源 的外来体、胶质瘤冷冻抗原分别冲击树突状细胞并与T淋巴细胞共同培 养，通过MTT法检测两种免疫方法体外对胶质瘤细胞的杀伤效应，并对 所得结果采用SPSS16．0进行统计学分析。 结果：胶质瘤细胞原代培养过程中，在倒置相差显微镜下观察生长良 好，贴壁细胞成长梭状，大小均匀、形态单一，呈弥漫型分布；exosome 在透射电镜下观察，可以看到多个呈类圆盘状、大小不等的半球体，直径 大小约40～100nm，该半球体由脂质双层膜包绕，外层的脂质双分子层染 色较深，内部为均匀的淡然区域；通过观察发现，单核细胞培养2～4个小 时成贴壁状态，此时单核细胞体积较小、呈较光滑的圆形。继续进行培养， 2～3天时细胞的形状发生变化，由以前的圆形逐渐变成无规则形状，体积 4)。第5天时，细胞呈簇状分 较以前变大，表面出现一些较小的突起(Fig 布同时伸出许多较大的树突状突起，体积较以前更大，另外还可以观察到 5)。向树突状细胞培养液中分别加入exosome或 有少量的悬浮细胞(Fig 胶质瘤冷冻抗原，共养到第7天时，加入细胞因子TNF。Q继续培养24d时， 此时大部分细胞呈悬浮状态，细胞表面伸出大量树突状突起，为典型的树 中文摘要 细胞对恶性胶质瘤细胞杀伤率分别是17．50％±1．13％、21．18％±1．36％、 发现存在显著性差p0．05)。 结论：胶质瘤细胞原代培养液经过差速离心的方法，可以分离出外来 体，这种外来体具有很好的免疫活性。利用淋巴细胞裂解液并采用离心方 法，可以在外周血中获取大量单核细胞glT淋巴细胞，这些单核细胞在细 将胶质瘤细胞来源的外来体致敏树突状细胞后，它可以激活细胞毒性T淋 巴细胞反应，从而特异性杀伤胶质瘤细胞，并且其特异性杀伤胶质瘤细胞 能力，明显优于胶质瘤冷冻抗原致敏树突状细胞所产生的细胞毒效应。 关键词：外来体：胶质瘤；树突状细胞：杀伤效应：细胞毒性T淋巴 细胞；差速离心法 英文摘要 of T Preliminary studycytotoxic dendritic withexosomes derivedfrom cells(DCs)pulsed glioma cells ABSTRACT toconformthe cellscanbe Objective：Designed isolated